致豬水腫病大腸桿菌二重PCR檢測方法及三價滅活菌苗研究.pdf

1、本研究主要開展了致豬水腫病大腸桿菌二重PCR檢測方法建立，豬水腫病三價油乳劑滅活菌苗研究等方面的工作，具體研究內容如下： 1．參照GenBank上發(fā)表的水腫毒素(類志賀氏毒素II型變異體SLT-IIe)B亞基和黏附素F18ab菌毛FedA的基因序列，設計了兩對引物，建立了一種對致豬水腫病大腸桿菌的兩個致病因子(SLT-IIe和F18ab)同時進行擴增的二重PCR檢測方法，該PCR方法最低檢出菌量為10<'1>CFU。運用建立的致

2、豬水腫病大腸桿菌二重PCR檢測方法，從臨床分離的170株致病性大腸桿菌中鑒定出6株致豬水腫病大腸桿菌；對其進行O抗原血清型鑒定，3株為O<,139>，2株為O<,138>，1株為O<,74>。 2．以SPF級昆明小鼠作為動物模型，對鑒定的6株致豬水腫病大腸桿菌進行毒力測定。確定血清型O<,74>菌株WH1、血清型O<,138>菌株WH29、血清型O<,139>菌株WH355疫苗的種子菌株。 3．用篩選確定的種子菌(血清型

3、O<,74>菌株WH1、血清型O<,138>菌株WH29、血清型O<,139>菌株WH3)制備豬水腫病三價油乳劑滅活菌苗，免疫SPF級昆明小鼠，進行免疫效力試驗。每只小鼠皮下注射0.2mL菌苗，首免21天后二免，第二次免疫14天后，用相應血清型的菌株攻毒，結果表明該疫苗對免疫小鼠的保護率在87.5％以上。 4．用制備的豬水腫病三價油乳劑滅活菌苗免疫斷奶仔豬，進行安全性、免疫效力、免疫期試驗和抗體消長檢測。仔豬免疫接種后1個星期，

4、體溫、食欲、精神狀態(tài)沒有明顯改變；每頭仔豬頸部肌肉注射2mL菌苗，首免21天后二免，第二次免疫14天后，用相應血清型的菌株攻擊，效力試驗結果表明該疫苗對仔豬的保護率均在80％以上；抗體消長曲線表明仔豬免疫接種后2周開始產(chǎn)生抗體，至4周時抗體水平已超過有效免疫保護的抗體水平，且能維持較高水平至180天以上。 本研究建立的二重PCR檢測方法為豬水腫病臨床診斷、病原的分離、鑒定提供了方法；運用該方法鑒定出6株致豬水腫病大腸桿菌，為進一