VBNC狀態(tài)大腸桿菌RT-PCR檢測(cè)方法的建立.pdf

1、細(xì)菌活的非可培養(yǎng)狀態(tài)(viable but nonculturable state，VBNC)指細(xì)菌遭受不良環(huán)境條件下所表現(xiàn)出的一種適合他存活的策略，其表現(xiàn)為在傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)但仍然是活的并具有代謝活性，仍能夠保持它的致病性或毒力基因，并且這種狀態(tài)的細(xì)菌在適當(dāng)?shù)臈l件下可以恢復(fù)為可培養(yǎng)狀態(tài)。在環(huán)境微生物質(zhì)量評(píng)估中對(duì)于VBNC菌的檢測(cè)是非常重要的，這不僅是因?yàn)榧?xì)菌的致病性更重要的在于污染標(biāo)準(zhǔn)指示菌，如大腸桿菌.因此建立一種能夠檢測(cè)

2、VBNC狀態(tài)下的細(xì)菌并且能夠確定它們的存活力是非常必要的。 本試驗(yàn)選取一株鵝源的大腸桿菌，一株貂體內(nèi)的分離的大腸桿菌進(jìn)行了活的非可培養(yǎng)狀態(tài)誘導(dǎo)，將兩株大腸桿菌懸浮于液體LB(PH2-3)中，置于4℃的低溫靜止培養(yǎng)，兩株大腸桿菌均可進(jìn)入活的非可培養(yǎng)狀態(tài)。但因菌株不同進(jìn)入VBNC狀態(tài)的時(shí)間也不同，A142天，A255天。并連同早期已經(jīng)誘導(dǎo)進(jìn)入VBNC狀態(tài)的兩株大腸桿菌D1 D3進(jìn)行核酸的提取，反轉(zhuǎn)錄，PCR闊增及其電泳分析，并且結(jié)合