Toll樣受體4在下肢缺血再灌注血管損傷中的作用.pdf

1、目的：急性肢體缺血是一種危險(xiǎn)性極高的動(dòng)脈性疾病，發(fā)生后需緊急重建血運(yùn)，恢復(fù)血流灌注，但血運(yùn)恢復(fù)后會(huì)導(dǎo)致缺血再灌注損傷，不僅可引起局部組織損傷，還可導(dǎo)致遠(yuǎn)位器官的損傷，出現(xiàn)多器官功能衰竭。TLRs通過LRRs結(jié)構(gòu)域識(shí)別病原體相關(guān)分子模式，進(jìn)而刺激炎癥因子的生成，參與病原體的殺傷。TLR4受體作為TLRs的一員，在體內(nèi)廣泛分布，幾乎分布于所有的細(xì)胞系，主要表達(dá)于宿主的防御功能細(xì)胞，介導(dǎo)多種疾病，以炎癥反應(yīng)為主，誘導(dǎo)多種炎癥因子基因表達(dá)。TL

2、R4在多種器官缺血再灌注損傷中有重要作用，如肝、腎、脊髓、大腦等器官，可以啟動(dòng)免疫反應(yīng)和引發(fā)炎性反應(yīng)，敲除TLR4基因后可明顯減輕缺血再灌注損傷。但TLR4在缺血再灌注血管損傷中的作用尚不清楚，本實(shí)驗(yàn)擬證明TLR4在小鼠下肢缺血再灌注血管損傷中的作用。
　　方法：⑴血流動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn):本研究采用橡皮圈繞扎法建立小鼠下肢缺血再灌注模型，將C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(control)、缺血組(Ischemia)和再灌注模型組(

3、Reperfision)，激光多普勒血流成像儀分別檢測(cè)各組血流灌注情況。⑵缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn):將C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(control)和缺血再灌注組(IR)，免疫組化檢測(cè)TLR4、HMGB1、TNF-α及IL-6的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)TNF-α、IL-6的表達(dá)，TUNEL技術(shù)檢測(cè)血管壁細(xì)胞凋亡情況。⑶TLR4實(shí)驗(yàn):將小鼠缺血再灌注模型分為野生(WT)模型組和TLR4基因敲除（TLR4-/-）模型組，RT-PCR檢測(cè)T

4、NF-α、IL-6的表達(dá)，TUNEL技術(shù)檢測(cè)血管壁細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：①采用橡皮圈繞扎法成功建立小鼠下肢缺血再灌注模型，橡皮圈套扎后術(shù)側(cè)后爪皮膚立即蒼白，溫度降低，F(xiàn)lux迅速下降，健側(cè)肢體后爪未出現(xiàn)以上表現(xiàn)。再灌注后術(shù)側(cè)后爪出現(xiàn)腫脹，皮溫升高，F(xiàn)lux逐漸升高。②缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)中，IR組血管組織的TLR4、HMGB1、TNF-α和IL-6的表達(dá)及凋亡情況較control組明顯升高(P＜0.01)。③TLR4基因敲除后，