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文檔簡介
1、目的:觀察高糖培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞連接相關(guān)蛋白(occludin、VE-cadherin和connexin40)的表達(dá)變化,探討Ang-1對高糖環(huán)境下這些內(nèi)皮細(xì)胞連接相關(guān)蛋白的影響。
方法:將體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為正常組(5.5mmol/L葡萄糖),甘露醇組(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇),高糖組(30mmol/L葡萄糖),Ang-1干預(yù)組(30mmol/L葡萄糖+0.25mg/LAng
2、-1),用相應(yīng)的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h、48h后收集細(xì)胞,分別用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-TimePCR)檢測各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞occludin、VE-cadherin和connexin40mRNA的表達(dá),免疫熒光、免疫組化方法檢測各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞occludin、VE-cadherin和connexin40蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:(1)正常組和甘露醇組細(xì)胞均有occludin、VE-cadherin和connexin40m
3、RNA的表達(dá),但兩組間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);高糖組細(xì)胞occludin、VE-cadherin和connexin40mRNA的表達(dá)均較正常組下調(diào)(P<0.01),并呈時間依賴性(24hvs48h,P<0.05);Ang-1干預(yù)組細(xì)胞occludin、VE-cadherin和connexin40mRNA的表達(dá)雖低于正常組(P<0.05),卻較高糖組表達(dá)上調(diào)(P<0.05),(2)免疫熒光和組化顯示occludin、VE-cad
4、herin和connexin40主要表達(dá)于胞膜和胞漿,正常組和甘露醇組細(xì)胞均有表達(dá),但兩組間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);高糖組細(xì)胞occludin、VE-cadherin和connexin40蛋白表達(dá)均較正常組下調(diào)(P<0.01),并呈時間依賴性(24hvs48h,P<0.05);Ang-1干預(yù)組細(xì)胞occludin、VE-cadherin和connexin40蛋白表達(dá)雖低于正常組(P<0.05),卻較高糖組表達(dá)上調(diào)(P<0.05
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