腎臟缺血再灌注期間乙醛脫氫酶2的表達變化以及miR-146a對其調控機制.pdf

1、目的：
　　器官移植的缺血過程不可避免，再灌注又會給器官帶來的二次損傷，這是各種臨床治療方法的矛盾所在，其復雜的發(fā)生機制使其進一步研究處于瓶頸。ALDH2是目前發(fā)現(xiàn)的在人體中具有重要作用的一種酶，其在多種器官IR中的保護作用已被證實。而在腎臟IR中的作用有待證實。另有研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a可通過對ALDH2的轉錄后調控，在心臟、小腸的 IR損傷中發(fā)揮保護作用。因此，我們希望通過本實驗初步探討ALDH2在腎臟IR中的作用，以及m

2、iR-146a對ALDH2的調控作用及其可能的調控機制。為進一步研究ALDH2在腎臟I/R中的作用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　第一部分為體內實驗，采用雄性C57BL/6J（H-2Kb）小鼠，8-10周齡，夾閉雙腎腎蒂30min制作缺血再灌注損傷模型，各個時間點下腔靜脈取血及雙腎，HE染色觀察腎臟病理損傷情況，檢測血液肌酐水平，RT-PCR檢測ALDH2及miR-146a表達，Western Blot檢測ALDH2蛋白表達

3、。
　　第二部分為體外實驗，采用雄性C57BL/6J（H-2Kb）小鼠，8-10周齡。分離提純小鼠腎小管上皮細胞及腹腔巨噬細胞，石蠟油法模擬I/R損傷，10uM H2O2模擬氧化應激狀態(tài)，各時間點Trizol法提取細胞RNA，RT-PCR檢測ALDH2及miR-146a表達。
　　結果：
　　小鼠腎臟熱缺血IR后3h，ALDH2表達迅速上調，隨后逐漸下降，IR后12h恢復到接近假手術組水平。miR-146a在IR后3小

4、時表達顯著升高，隨后上調幅度逐漸縮小，至IR后72小時，miR-146a表達仍為對照組的3.7±0.7倍。腎臟缺血再灌注后1h，ALDH2蛋白迅速減少，并于3h降至最低，隨后逐漸升高，12h蛋白水平仍明顯低于對照組，24h達到頂峰后逐漸下降。與假手術組相比，IR1h、3h、6h、12h組ALDH-2蛋白表達顯著減少（P<0.01或P<0.001）；IR24h、72h組ALDH-2蛋白表達顯著增加（P<0.001）。
　　TEC：I

5、R后3h，ALDH-2表達顯著升高，隨后逐漸降低，刺激后24小時ALDH-2表達仍顯著高于對照組；IR后3h，miR-146a表達顯著降低；隨后逐漸升高，刺激后24小時miR-146a表達顯著升高，約為對照組的4.2±0.8倍；H2O2刺激后3h， ALDH-2表達顯著升高，隨后逐漸降低，刺激后24小時ALDH-2表達仍顯著高于對照組；H2O2刺激后6h內， miR-146a表達無明顯變化，刺激后24小時miR-146a表達顯著升高，約

6、為對照組的2.7±0.7倍。
　　MΦ：IR后3h ALDH-2表達水平即顯著升高，刺激后24小時ALDH-2表達約為對照組的4.2±0.8倍;IR后，原代MΦ的miR-146a表達水平無顯著變化;H2O2刺激后6h，ALDH-2表達水平顯著升高，刺激后24小時約為對照組的5.2±0.9倍;H2O2刺激后3h， miR-146a表達即開始上調，刺激后24小時miR-146a表達約為對照組的5.7±1.2倍。
　　結論：