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文檔簡介
1、研究目的:
大量研究發(fā)現(xiàn),父母所處的環(huán)境及其生活行為方式如化學因子暴露、運動、高脂飲食等因素可對其子代健康產(chǎn)生長遠的影響。迄今為止,大多數(shù)的研究集中于母系,如母親孕期的肥胖與子代的身體質量指數(shù)(Body mass index, BMI)相關,而且會導致成年子代對肥胖、糖尿病的易感性增加。相反,女性如在孕前或妊娠期間進行適當?shù)倪\動訓練,不僅能夠防止體重增加過多、促進自身代謝健康,還能夠降低子代成年后代謝性疾病的發(fā)病率。隨著跨代研
2、究的不斷深入,近年來父系對子代的影響也逐漸受到關注。研究顯示,父親吸煙、高脂飲食及職業(yè)暴露與毒物、化學有害物品等會對其子代癌癥的發(fā)病率、肥胖及精神健康等均產(chǎn)生影響。近年來,非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)已成為世界范圍內(nèi)最為普遍的慢性肝臟疾病。研究證實,母親的生活方式與子代NAFLD的發(fā)生密切相關,但目前關于父親的生活方式是否會對子代肝臟脂肪沉積產(chǎn)生影響尚無定論。本實驗通
3、過高脂飲食/有氧運動干預 F0雄性C57BL/6小鼠建立動物模型,研究其子代(F1)肝臟脂肪沉積之間的差異并探討其中的分子機制。試圖揭示父親的生活方式不僅影響自身的代謝健康,而且會通過跨帶繼承的方式對其子代的代謝健康產(chǎn)生影響。
研究方法:
(1)同窩 C57BL/6雄性小鼠(F0),21天斷乳后隨機分為安靜對照組(C)、高脂飲食組(HF)和運動組(E)。干預結束后與同窩正常飲食、安靜飼養(yǎng)的雌性小鼠交配。選取其雄性 F
4、1代小鼠為研究對象;(2)運動方案:運動組運動干預時間為6周、運動形式為75%VO2max強度的有氧跑臺訓練,60分/次,1次/天,5次/周;(3)高脂飲食配方:高脂飲食組采用 Research Diet Inc的高脂飲食飼料(供能比例:蛋白質20%,碳水化合物20%,脂肪60%)喂養(yǎng)12周;(4)口服葡萄糖耐量試驗:各組動物在4周齡時及高脂喂養(yǎng)4周結束后(8周齡)進行,小鼠禁食8小時后,稱重并記錄,經(jīng)尾靜脈取血,取血后迅速給小鼠經(jīng)口腔
5、灌注20%葡萄糖溶液(10μl/g),對灌注前即刻及灌注后15,30,60和120分鐘的血糖值進行檢測并記錄,計算每只小鼠血漿葡萄糖曲線下面積(Area under the curve, AUC);(5)肝臟組織油紅O染色:對新鮮肝臟組織進行OCT包埋,冰凍切片并行油紅O染色,鏡下觀察染色結果,并使用Image Pro Plus6.0軟件計算 IOD值;(6)采用 Real-Time PCR法檢測定小鼠肝臟組織 SREBP-1, Fas
6、n, ChREBP, Pgc-1α, Tfam, Nrf1, Cox4 mRNA的表達;(7)采用Western blot檢測肝組織AMPK, p-AMPK-T172, ACC, p-ACC-S79, CPT-1, PGC-1α, SREBP-1, LC3A/B及P62蛋白表達。
研究結果:
(1) F1代小鼠身長體重比較:父系的高脂飲食/運動對雄性小鼠身長無影響但在4周高脂飲食干預期間, HFM組小鼠的體重明顯高于
7、 CM組小鼠,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而 EM組體重低于 CM組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);
(2) F1代小鼠糖脂代謝指標:4周正常飲食條件下三組 F1代雄性小鼠各個時間點血糖值及AUC均無顯著性差異,但在4周高脂飲食誘導后發(fā)現(xiàn):與 CM組小鼠相比,HFM組小鼠 OGTT曲線及AUC結果顯示,HFM組較CM組明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而EM組小鼠與CM組小鼠相比其空腹及60min的血糖
8、值明顯減低(P<0.01或P<0.001),但兩組間AUC無明顯差異。三組小鼠血脂分析顯示,與 CM組小鼠相比,HFM組小鼠 TG, T-CHO, LDL-C, FFA均明顯增高,HDL-C明顯減低差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.001);而 EM組小鼠TG, T-CHO, LDL-C和FFA均顯著低于 CM組小鼠,而HDL-C較 CM組小鼠明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05, P<0.01或P<0.001);(3) F
9、1代小鼠肝臟油紅O染色結果: HFM組小鼠較CM組小鼠肝臟脂質沉積顯著增多;而EM組較CM組小鼠肝臟脂質沉積明顯改善。HFM組小鼠肝臟油紅O染色陽性區(qū) IOD值較 CM組增加58.33%(P<0.01),而EM組小鼠肝臟油紅 O染色陽性區(qū) IOD值較 CM組明顯減少79.17%差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.001);
(4) F1代小鼠肝臟脂肪酸從頭合成相關因子的表達:HFM組小鼠肝組織中SREBP-1及Fasn mRNA表達較
10、 CM組明顯增加差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。EM組小鼠肝組織 SREBP-1及 Fasn mRNA表達較 CM組明顯明顯減低(P<0.05)。而CHREBP mRNA表達三組間無明顯差異;SREBP-1蛋白表達與其mRNA表達變化趨勢基本一致(P<0.05);而ACC蛋白表達三組間無明顯差異;(5) F1代小鼠肝臟脂肪酸有氧氧化及線粒體生物合成相關因子的表達:與CM組比較,HFM組肝組織pAMPKα-T172,pACC-S79蛋白
11、表達明顯減低(P<0.05);而EM組小鼠肝組織中AMPKα, pAMPKα-T172, pACC-S79蛋白表達較 CM組明顯增加(P<0.05),但CPT-1蛋白表達在三組間無明顯差異。與CM組比較, HFM組肝組織Pgc-1α mRNA及蛋白表達均明顯減低(P<0.05),其下游靶基因Nrf1, Tram mRNA表達呈現(xiàn)相似趨勢,其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而EM組小鼠肝組織中Pgc-1αmRNA及蛋白表達以及其下游靶基
12、因Nrf1, Tram mRNA表達均明顯增多(P<0.05),但三組間Cox4 mRNA表達無明顯差異;
(6) F1代小鼠肝臟自噬相關因子的表達:與CM組比較,HFM組肝組織LC3-II/I明顯減低,P62明顯增高;而EM組小鼠LC3-II/I較CM組明顯增高,P62明顯減低,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
研究結論:
(1)高脂飲食干預父系小鼠其雄性子代(F1)小鼠較對照組 F1雄性小鼠相比表現(xiàn)
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