豬繁殖與呼吸綜合征重組假型桿狀病毒基因工程疫苗研究.pdf

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬繁殖與呼吸綜合征重組假型桿狀病毒基因工程疫苗研究StudyontheGenetic一EngineeringVaecineofPorcineReProductiveandResPiratorySyndromeMediatedbyRecombinantPseudotyPeBaculovirus碩士研究生:王升平指導(dǎo)教師:方六榮教授專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:動(dòng)物病毒學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:2008

2、年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二00八年六月3.1試驗(yàn)材料....................……，............................................................................................……313.1.1毒株、細(xì)胞與菌株........................................................

3、...............................……313.1.2載體與質(zhì)粒............................................................................................................……313.1.3工具酶及主要試劑..................................................

4、.......……323.1.4培養(yǎng)基與抗生素及其配制..................................................................……333.1.5免疫反應(yīng)試驗(yàn)所用抗原及血清................................................................................……343.1.6主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制..

5、..........................................................................……343.1.7實(shí)驗(yàn)動(dòng)物....................................................................................................................……353.2試驗(yàn)方法......

6、..................................……，........................................................................……353.2.1限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng).............................................……““…353.2.2PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的電泳檢測(cè)....................

7、.....................................……，一，“.....……3612.3線性質(zhì)粒DNA末端去磷酸化...............................................................……，二“，..一..……363.2.4PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物回收與純化.....................................................

8、..……“..........……”.363.2.5外源DNA片段與質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)............................……“.........……，…，.，..……，.…373.2.6大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備(氛化鈣法)..............……，…，.…，，…，，…，..........................……373.2.7連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化............................

9、...........……，.................................................……383:28質(zhì)粒的制備與鑒定一，，..…，...……，.……，，...........................……383.2.9質(zhì)粒轉(zhuǎn)染(脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法).........................................................................

10、...……403.2.10構(gòu)建重組桿狀病毒的操作流程及示意圖..............................................................……403.2.11重組穿梭載體(Bacmid)的構(gòu)建.........................................................................……423.2.12重組穿梭載體(Bacmid)的提取.

11、.........................................................................……423.2.13重組桿狀病毒獲得........................................................................……423.2.14重組桿狀病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)Maco145細(xì)胞..............................

12、......................……，.............……423.2.巧間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)檢測(cè)目的蛋白的體外表達(dá)............……，.....................……423.2.16微量中和試驗(yàn)(固定病毒稀釋血清法).............................................................……433.2.17細(xì)胞免疫的檢測(cè)........

13、.....................……，..................................................................……433.2.18動(dòng)物試驗(yàn)..................................................................................................................……

14、463.2.19統(tǒng)計(jì)學(xué)方法..............................................................................................................……46第4章結(jié)果與分析.”.........……”..”““:.”“:.”“””..”..“..“”“““”..“”””..“..”“….“““….”..”.474.1穿梭質(zhì)粒Bacrnid一

15、G一Sln6的構(gòu)建...............................................................................……474.1.1pFastBac一質(zhì)粒的構(gòu)建............................................................................................……474.1.2pFastBac

16、一G5耐6轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建...........................................................................……484.1.3重組Bacmid一Sln6的構(gòu)建....................................................................................……494.2重組桿狀病毒BVG一sn汀6獲得.

17、.................................................................................……514.3間接免疫熒光檢測(cè)PRRSVORF6和修飾的O盯5基因的表達(dá)...............................……514.4重組桿狀病毒毒價(jià)測(cè)定.......................................................