腸產毒性大腸埃希菌F4ac菌毛蛋白FaeG亞單位的原核表達及免疫學鑒定.pdf

1、目的
　　 克隆并表達腸產毒性大腸埃希菌(ETEC)F4ac菌毛蛋白亞單位FaeG,鑒定其抗原性和免疫原性,為制備預防幼畜ETEC感染的疫苗奠定基礎。
　　 方法
　　 以ETEC(C83902)基因組DNA為模板,PCR擴增faeG基因,插入原核表達質粒pGEX-6P-1,構建重組質粒pGEX-faeG。將pGEX-faeG轉化大腸埃希菌BL-21,IPTG誘導表達。SDS-PAGE分析表達蛋白的相對分子質量和

2、表達形式,Western blot鑒定其抗原性。將表達菌超聲破碎后離心提取包涵體制備抗原,經口灌喂免疫小鼠,檢測小鼠血清中抗FaeG的IgG、IgA,糞便IgA和腸粘液IgA,鑒定其免疫原性。重組蛋白FaeG口服免疫小鼠,進行動物免疫保護實驗。
　　 結果
　　 擴增的faeG基因全長786bp,與基因文庫中的faeG基因同源性達96％。重組質粒pGEX-faeG經PCR及雙酶切鑒定確有插入片段,且序列完整。表達產物Fa

3、eG相對分子質量約53KD,主要存在于碎菌后的沉淀中,以包涵體形式表達。Western blot顯示該蛋白可與ETECF4ac陽性血清特異性結合,免疫后小鼠體內抗FaeG IgG、IgA明顯高于PBS對照組和GST對照組。免疫小鼠至少能抵抗1MLD的大腸埃希菌強毒株C83902的攻擊。
　　 結論
　　 成功構建了ETEC F4ac菌毛蛋白亞單位FaeG的重組質粒pGEX-faeG,表達了重組蛋白FaeG,該蛋白具有良好