多株豬致病性大腸桿菌菌毛培養(yǎng)、提取及菌毛蛋白的研究.pdf

1、本文對腹瀉仔豬糞便中分離出的12株大腸桿菌進行生化鑒定和致病性檢測，篩選出了7株有致病性的大腸桿菌。經(jīng)電子顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)EC308、EC316、EC358和EC369 4株大腸桿菌接種于TSB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48h，連續(xù)傳代3次，菌毛可以得到良好的表達。試驗證明用加熱法處理、硫酸銨沉淀的方法，可有效地保證提取菌毛蛋白數(shù)量和純度。用這4株分離菌制備全菌抗血清和菌毛抗血清，進行菌株間血清學交叉試驗，發(fā)現(xiàn)這4株大腸桿菌的全菌抗原和菌毛抗

2、原之間存在交叉現(xiàn)象，其中菌毛蛋白是這4株大腸桿菌的主要保護性抗原。 提取4株菌的菌毛蛋白，經(jīng)SDS-PAGE檢測出各樣品蛋白分子量，EC369和EC358菌毛提取物分別有3條蛋白條帶，分子量分別為20.0KD、40.5KD、72.0KD和20.0KD、36.4KD和85.6KD；EC3 16菌毛提取物有4條蛋白條帶，分子量分別為20.0KD、38.4KD、45.0KD和66.2KD；EC308菌毛提取物僅有一條分子量為24.0K

3、D的蛋白條帶。其中分子量為20.0KD蛋白條帶為EC369、EC358和EC316所共有。 Western-Blotting試驗顯示，菌株EC369、EC358及EC316分子量為20KD的蛋白條帶和菌株EC308分子量為24KD的蛋白條帶均能與各株菌的菌毛抗血清呈現(xiàn)反應條帶。因此，結(jié)合甘露糖敏感血凝反應(MRHA)的試驗結(jié)果，可以判斷EC308表達的菌毛為K88，EC369、EC358和EC316的表達的菌毛為987P。該試驗