豬腸外致病性大腸桿菌分離鑒定及雙基因缺失突變株構(gòu)建.pdf

1、大腸埃希氏菌(Escherichia Coli，E.Coli)通常稱(chēng)為大腸桿菌，學(xué)術(shù)界根據(jù)其臨床致病性將其分為三類(lèi):共生型大腸桿菌，腸內(nèi)致病性大腸桿菌，腸外致病性大腸桿菌。共生型大腸桿菌與宿主是互利共生的關(guān)系，并伴隨其終生，經(jīng)糞便散播到周?chē)h(huán)境中，一般不致病;腸內(nèi)致病性大腸桿菌廣泛存在于少數(shù)宿主的腸道內(nèi)和環(huán)境中，機(jī)體免疫功能正常時(shí)一般不會(huì)引起腸道外的感染，但免疫力低下時(shí)會(huì)出現(xiàn)腸道外的感染;腸外致病性大腸桿菌(Extraintestina

2、l Pathogenic Escherichia Coli,ExPEC)可使不同的宿主發(fā)生泌尿道感染(UPEC)、腦膜炎(NMEC)、敗血癥(Septicemia)、肺炎(Pneumonia)、腹膜炎(Pleurisy)及其它腸外軟組織感染(Soft Tissue Infections)，因此受到醫(yī)學(xué)界普遍關(guān)注，ExPEC與其他病菌的混合感染，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失?；谝陨纤瞿c外致病性大腸桿菌的危害我們開(kāi)展了本實(shí)驗(yàn)，旨在通過(guò)對(duì)

3、臨床分離的腸外致病性大腸桿菌進(jìn)行研究，掌握ExPEC的流行病學(xué)規(guī)律，為該病的診斷與防治打下基礎(chǔ);另外開(kāi)展了豬源腸外致病性大腸桿菌ΔkpsM-ΔiucB雙基因缺失菌株構(gòu)建及疫苗的研制工作，希望得到有效控制ExPEC的方法。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴選取病豬肺臟、肝臟、脾臟、腦、氣管、關(guān)節(jié)部位的病料，進(jìn)行分離培養(yǎng)、PCR鑒定試驗(yàn)，得到50株豬腸外致病性大腸桿菌，并對(duì)這些菌進(jìn)行了毒力基因擴(kuò)增，遺傳群系鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，所分

4、離出的腸外致病性大腸桿菌均具有2個(gè)及以上毒力基因，遺傳群系以A、B1群系為主，敏感藥物有頭孢他啶、頭孢噻肟等頭孢類(lèi)藥物，但是臨床上起作用的藥物非常有限，耐藥現(xiàn)狀嚴(yán)重。⑵以本實(shí)驗(yàn)室成功構(gòu)建的豬源腸外致病性大腸桿菌強(qiáng)毒株P(guān)CN033單基因缺失菌ΔkpsM為受體菌，缺失腸外致病性大腸桿菌PCN033iucB基因菌株為供體菌進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移，構(gòu)建不含抗性的豬源腸外致病性大腸桿菌ΔkpsM-ΔiucB的雙基因缺失突變株，并對(duì)其生物學(xué)特性和毒力進(jìn)行了研