K88菌毛蛋白FaeG基因的克隆、表達及單克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、由產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)引起的仔豬、犢牛和羔羊腹瀉是幼畜的一種最常見病,在世界范圍造成嚴重的經(jīng)濟損失.ETEC菌株的致病前提是通過細菌表面的黏附素與宿主黏膜上皮細胞表面的相應受體結(jié)合,從而在該局部組織定居、繁殖、產(chǎn)生毒素或侵入深部損傷或破壞組織,引起疾病或造成隱性感染.該研究根據(jù)已發(fā)表的F4菌株faeG基因序列設(shè)計引物,用PCR擴增法從六株標準F4菌株中擴增出0.8

2、kb的faeG基因序列,通過測序和序列分析比較,所獲核苷酸序列與已發(fā)表的標準F4菌株序列同源性大于95%,個別核苷酸差異可能由于菌株不同所致.將不含信號肽的faeG片段按正確的閱讀框架克隆入pGEX-6p-1載體中的谷胱苷肽-G-轉(zhuǎn)移酶(GST)基因下游,用IPTG誘導實現(xiàn)其在大腸桿菌中的表達.SDS-PAGE電泳和Western-blotting結(jié)果顯示,表達的融合蛋白約為53kDa.將原核表達產(chǎn)物經(jīng)復性和谷胱苷肽活化的Sepharo

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