高蛋氨酸飲食誘導血管內皮損傷大鼠模型的建立、評價及機制研究.pdf

1、目的:高同型半胱氨酸血癥與血管內皮細胞功能紊亂和器質性損傷緊密相關，是心腦血管疾病發(fā)生的獨立的誘發(fā)因素。增加蛋氨酸攝入量可以誘發(fā)高半胱氨酸血癥，但尚缺乏系統(tǒng)的體內動物實驗論證依據。本研究旨在探討高蛋氨酸飲食誘導血管內皮細胞損傷模型建立的條件、特征、可復制性及其可能機理。
　　方法:通過動物實驗系統(tǒng)研究不同比例添加蛋氨酸飲食和不同周期飼養(yǎng)對大鼠血管內皮細胞損傷模型建立的影響及其可能機制。
　　1、建模條件的確立和模型特征評價:

2、雄性SD大鼠(n=40)，180-220g，隨機分為正常飲食對照組(對照組，n=10)、1％高蛋氨酸飲食組(1％組，n=10)、3％高蛋氨酸飲食組(3％組，n=10)和5％高蛋氨酸飲食組(5％組，n=10)。對照組喂飼普通基礎飼料，高蛋氨酸飲食組大鼠分別喂飼含1％、3％和5％蛋氨酸的飼料，持續(xù)8周。實驗開始（0周）、第2周、4周、6周和8周末行尾靜脈取血，采用Elisa法檢測血清同型半胱氨酸(Hcy)、一氧化氮(NO)和內皮素(ET)含

3、量評價血管內皮功能障礙，采用掃描電鏡觀察主動脈弓血管內皮細胞形態(tài);
　　2、模型可復制性研究:另取雄性SD大鼠(n=48)隨機分為正常飲食對照組(n=12)、1％組(n=12)、3％組(n=12)和5％組(n=12)，持續(xù)8周。每組隨機選取6只大鼠，收集血液和主動脈組織樣本。其余各高蛋氨酸組大鼠全部置換成正常飲食，持續(xù)2周后（10周末），收集全部剩余大鼠的血液和主動脈樣本。取8周和10周的血清和組織樣本重復上述方法1中指標檢測;<

4、br>　　3、成模機理研究:取上述動物實驗8周末血清和主動脈組織樣本，Elisa法檢測血清白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和主動脈誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)含量;Western blot法檢測主動脈NF-κB、磷酸化IκB-α、巨噬細胞趨化因子(MCP)和環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)蛋白表達;用血清樣品液相色譜-質譜(LC-MS)代謝組學方法分析血管內皮損傷模型大鼠與正常大鼠間的差異性物質分析。
　　結果

5、:
　　1、不同比例添加蛋氨酸飲食與不同飼養(yǎng)周期對大鼠血清Hcy水平具有顯著地交互作用（P時間×組別＜0.05）。與對照組相比，1％組大鼠血清Hcy含量在飼養(yǎng)第8周顯著升高(P=0.026)，而3％和5％組大鼠血清Hcy含量分別在在飼養(yǎng)第4周和第6周顯著升高，差異具有極顯著性(P＜0.01);與正常飲食對照組相比，3％和5％組大鼠血清NO、NOS含量顯著下降而ET含量顯著升高，且NO/ET比值顯著降低，差異均具有顯著性（P組間＜0

6、.05）;掃描電鏡顯示1％組大鼠血管內皮細胞排列紊亂、胞間隙明顯增寬、偶見有細胞碎片和血細胞附著;3％組呈典型“蟲蝕”樣變，病灶邊緣呈鋸齒狀，散在血細胞和細胞碎片;5％組血管內皮大片崩解或脫落，膠原裸露，伴有大量血細胞附壁、血栓形成和脂質沉積。
　　2、8周高蛋氨酸飼料和10周混合飼料（8周高蛋氨酸+2周正常飼料）均可以明顯提高大鼠血清Hcy和ET而降低NO水平，且與對照組相比差異均具有顯著性（P組間＜0.05）;10周混合飼料各

7、組與相應8周高蛋氨酸飲食組相比，上述指標均無明顯改變，且差異均無顯著性。
　　3、與正常飲食對照組相比，8周末3％和5％組血清IL-6和TNF-α含量顯著升高，且差異具有顯著性(P＜0.05)，僅5％組大鼠主動脈iNOS含量顯著低于對照組;Western blot結果顯示，8周末3％和5％組大鼠主動脈NF-κB表達顯著高于對照組，而IκB-α和cGMP蛋白表達明顯低于對照組。
　　結論:低比例蛋氨酸飼料長期喂養(yǎng)和高比例蛋氨酸