煙霧暴露致血管內(nèi)皮損傷及藥物保護(hù)機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分褪黑素減輕煙霧暴露誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄的研究
　　目的:研究褪黑素對(duì)吸煙誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄的影響，以及褪黑素對(duì)吸煙誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈炎癥損傷的影響。
　　方法:將大鼠隨機(jī)分為三組(n=5):對(duì)照組、吸煙組、吸煙并注射褪黑素(5mg/Kg)組。給予香煙煙霧暴露并注射藥物7天后，給各組大鼠行頸動(dòng)脈球囊損傷。之后繼續(xù)之前的香煙煙霧暴露和藥物注射方案，14天后將各組大鼠的雙側(cè)頸動(dòng)脈取材。將各組大鼠的球

2、囊損傷側(cè)頸動(dòng)脈行彈力蛋白染色檢測(cè)其狹窄程度（內(nèi)膜面積/中膜面積;i/m），行CD45免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)其炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。Western blot檢測(cè)各組大鼠損傷對(duì)側(cè)頸動(dòng)脈的NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、eNOS的表達(dá)。
　　結(jié)果:吸煙組的i/m值明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，而吸煙并注射褪黑素組的i/m值明顯低于吸煙組(P＜0.01)。吸煙組的頸動(dòng)脈內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)程度

3、明顯高于對(duì)照組（P＜0.01），而吸煙并注射褪黑素組的頸動(dòng)脈內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯低于吸煙組(P＜0.01)。吸煙組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、eNOS的表達(dá)明顯高于對(duì)照組大鼠(P＜0.01)，而吸煙并注射褪黑素組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)上述因子的表達(dá)明顯低于吸煙組大鼠(P＜0.01)。
　　結(jié)論:吸煙能夠加重大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的內(nèi)膜增生，吸煙誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和eNOS表達(dá)的

4、降低可能是其原因之一。褪黑素能夠抑制吸煙大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的再狹窄，褪黑素的保護(hù)機(jī)制可能是抑制炎癥反應(yīng)和誘導(dǎo)eNOS的表達(dá)。褪黑素對(duì)吸煙引起的血管炎癥損傷起重要的保護(hù)作用。褪黑素在預(yù)防吸煙患者血管腔內(nèi)成型術(shù)后再狹窄方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
　　第二部分氯化血紅素減輕煙霧暴露誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄的研究
　　目的:研究氯化血紅素對(duì)吸煙誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄的影響，以及氯化血紅素對(duì)吸煙誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈炎癥損

5、傷的影響。
　　方法:將大鼠隨機(jī)分為四組(n=5):對(duì)照組、吸煙組、吸煙并注射氯化血紅素(50mg/Kg)組、吸煙并注射鋅原卟啉(15mg/Kg)組。給予香煙煙霧暴露并注射藥物7天后，給各組大鼠行頸動(dòng)脈球囊損傷。之后繼續(xù)之前的香煙煙霧暴露和藥物注射方案，14天后將各組大鼠的雙側(cè)頸動(dòng)脈取材。將各組大鼠的球囊損傷側(cè)頸動(dòng)脈行彈力蛋白染色檢測(cè)其狹窄程度（內(nèi)膜面積/中膜面積;i/m），行CD45免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)其炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。Wes

6、tern blot檢測(cè)各組大鼠損傷對(duì)側(cè)頸動(dòng)脈的NF-κB、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、HO-1的表達(dá)。PCR檢測(cè)各組大鼠損傷對(duì)側(cè)頸動(dòng)脈的IL-1β、IL-6、TNF-α的水平。
　　結(jié)果:吸煙組大鼠頸動(dòng)脈i/m值明顯高于對(duì)照組大鼠(P＜0.01)。吸煙并注射氯化血紅素組大鼠頸動(dòng)脈i/m值明顯低于吸煙組大鼠（P＜0.01）。吸煙并注射鋅原卟啉組大鼠頸動(dòng)脈i/m值明顯高于吸煙組大鼠(P＜0.05)。吸煙組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)炎癥細(xì)

7、胞的浸潤(rùn)明顯強(qiáng)于對(duì)照組（P＜0.01），吸煙并注射氯化血紅素組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯弱于吸煙組（P＜0.01），吸煙并注射鋅原卟啉組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯強(qiáng)于吸煙組(P＜0.01)。吸煙組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1的水平明顯高于對(duì)照組大鼠（P＜0.05），吸煙并注射氯化血紅素組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)上述因子的水平明顯低于吸煙組大鼠(P＜0.05)，吸煙并注射鋅原卟

8、啉組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)上述因子的水平明顯高于吸煙組大鼠(P＜0.05)。
　　結(jié)論:吸煙能夠通過(guò)誘導(dǎo)血管壁的炎癥反應(yīng)而加重大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的內(nèi)膜增生。氯化血紅素能夠通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)而抑制吸煙大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的再狹窄。氯化血紅素的保護(hù)作用可能是通過(guò)其誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。氯化血紅素對(duì)吸煙引起的血管炎癥損傷起重要的保護(hù)作用。氯化血紅素在預(yù)防吸煙患者血管腔內(nèi)成型術(shù)后再狹窄方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
　　第三部分氯化血紅素減輕

9、煙霧暴露引起的血管氧化損傷的研究
　　目的:研究氯化血紅素對(duì)吸煙引起的大鼠頸動(dòng)脈和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)氧化損傷的保護(hù)作用。
　　方法:將大鼠隨機(jī)分為四組(n=5):對(duì)照組、吸煙組、吸煙并注射氯化血紅素(50mg/Kg)組、吸煙并注射鋅原卟啉(15mg/Kg)組。給予香煙煙霧暴露并注射藥物7天后對(duì)各組大鼠頸動(dòng)脈進(jìn)行取材并留取各組大鼠血清。Western blot檢測(cè)各組頸動(dòng)脈中HO-1的表達(dá)。熒光探針2'，7'-DC

10、FH-DA檢測(cè)各組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)活性氧(ROS)的含量。將吸煙大鼠血清和正常大鼠血清分別加入HUVEC內(nèi)，熒光探針2'，7'-DCFH-DA檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS的含量，同時(shí)觀察氯化血紅素(50μ M)和鋅原卟啉(10μ M)對(duì)HUVEC內(nèi)ROS的影響。
　　結(jié)果:吸煙組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)HO-1的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組大鼠(P＜0.05)。吸煙組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)ROS的含量明顯高于對(duì)照組大鼠(P＜0.01)，吸煙并注射氯化血紅素組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)

11、ROS的含量明顯低于吸煙組大鼠(P＜0.05)，吸煙并注射鋅原卟啉組大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)ROS的含量明顯高于吸煙組大鼠(P＜0.05)。加入吸煙大鼠血清的HUVEC內(nèi)ROS的含量明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，加入吸煙大鼠血清的高表達(dá)HO-1的HUVEC內(nèi)ROS的含量明顯低于加入吸煙大鼠血清的HUVEC(P＜0.01)，加入吸煙大鼠血清的低表達(dá)HO-1的HUVEC內(nèi)ROS的含量明顯高于加入吸煙大鼠血清的HUVEC(P＜0.05)。
　　結(jié)