AP-2α在煙霧暴露所致的血管內(nèi)皮細胞凋亡中的作用及機制研究.pdf

1、慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是嚴重影響人類健康的常見多發(fā)病，患病人數(shù)多，死亡率高，社會經(jīng)濟負擔(dān)重，是全球性公共衛(wèi)生問題。該病發(fā)病機制未完全明了，且無理想的治療方法。煙霧暴露是COPD的重要致病因素。除慢性氣道和肺部炎癥、蛋白酶/抗蛋白酶失衡以及氧化/抗氧化失衡等學(xué)說外，肺間隔細胞凋亡在COPD發(fā)生發(fā)展中的作用日益受到重視，且與上述學(xué)說有千絲萬縷的聯(lián)系。肺間隔細胞凋亡的累積效應(yīng)將導(dǎo)致肺氣腫的發(fā)生和呼吸功能的降低，導(dǎo)致呼吸衰竭的發(fā)生。因此，

2、干預(yù)肺間隔細胞凋亡是目前COPD防治研究中的一項重要課題。轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-2（transcription factoractivator protein-2，AP-2）家族是一組發(fā)育調(diào)節(jié)，維甲酸誘導(dǎo)的基因DNA結(jié)合蛋白，AP-2α（transcription factor activator protein-2α，AP-2α）是最早被鑒定和研究的AP-2家族成員，參與了許多基因的表達如VEGF、P53、p21WAF/CIP、Bcl-2

3、、錳過氧化物岐化酶（Manganese superoxide dismutase，MnSOD）等；參與了脊椎動物細胞黏附、生長、凋亡、組織分化、胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生等病理生理過程。其中大部分研究集中在AP-2α對增殖凋亡的調(diào)控上。依據(jù)細胞類型及實驗條件的不同，AP-2α分別發(fā)揮促凋亡或促增殖的作用。但是，在煙霧暴露所致的COPD大鼠肺組織及香煙提取物（CSE）刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV304中AP-2α是否表達，是否對煙霧暴露引起的細

4、胞凋亡及Caspase-3的活化有影響，其機制是否與其激活結(jié)構(gòu)域有關(guān)等等，尚無相關(guān)報道。 目的：研究熏煙所致COPD大鼠肺組織中肺間隔細胞的凋亡情況及AP-2α的表達水平；進一步通過細胞實驗研究AP-2α對CSE誘導(dǎo)的ECV304凋亡的影響及機制。 方法：采用被動吸煙80天的方法復(fù)制大鼠COPD模型，采用TUNEL法檢測肺組織細胞凋亡、Westernblot法檢測肺組織中活化的Caspase-3、免疫組織化學(xué)及Weste

5、rnblot法檢測胞核中AP-2α蛋白的表達；通過MTT、Hoechst染核、Westernblot等方法研究CSE對ECV304增殖、凋亡、Caspase-3和AP-2α表達的影響；通過腺病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、Hoechst染核、Westernblot等方法研究過表達AP-2α對CSE誘導(dǎo)的ECV304凋亡、Caspase-3活化的影響。采用質(zhì)粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、Hoechst染核、Westernblot等方法研究過表達AP-2α的突變體AP-2

6、△（只具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域，而沒有轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域）對CSE誘導(dǎo)的ECV304凋亡、Caspase-3活化的影響。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，用Bartlett法進行方差齊性檢驗，兩組間比較用t檢驗，多組間比較用單因素方差分析，多個樣本均數(shù)的多重比較用LSD-t檢驗。多個樣本率的比較用X2檢驗。 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)，煙霧暴露80天成功復(fù)制了COPD大鼠模型，表現(xiàn)為炎癥細胞浸潤，肺泡腔擴大，F(xiàn)EV0.3/FVC降低，肺間隔細胞凋亡增多，

7、Caspase-3活化增加；同時AP-2α蛋白表達增加。在CSE刺激的ECV304細胞中，細胞凋亡增多，AP-2α表達增加；AP-2α的過表達可抑制CSE誘導(dǎo)的ECV304細胞凋亡，表現(xiàn)為細胞凋亡率降低和Caspase-3的活性片段（17KD）減少。AP-2△瞬時轉(zhuǎn)染ECV304細胞并使其過表達后對基礎(chǔ)及CSE誘導(dǎo)的細胞凋亡、Caspase-3的活化沒有明顯影響。 結(jié)論：AP-2α在煙霧暴露法復(fù)制的COPD大鼠肺組織及CSE刺激