氧化-抗氧化失衡及細胞凋亡在煙霧暴露所致COPD發(fā)病機制中的作用.pdf

1、目的：探討腺病毒介導(dǎo)GPX基因轉(zhuǎn)染對香煙煙霧提取物(CSE)致血管內(nèi)皮細胞氧化損傷和凋亡的影響。 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(ECV304)，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。予0、30、50、70感染倍數(shù)(MOI)的腺病毒連接LacZ(Ad-LacZ)轉(zhuǎn)染ECV304，觀察其轉(zhuǎn)染率。予0％、5％、10％CSE干預(yù)ECV304 24h及10％CSE干預(yù)0、6、12、24h，分別觀察其凋亡指數(shù)(AI)。將ECV304分為四組培養(yǎng)，分

2、別予0％CSE(空白組)、10％CSE(CSE組)、LacZ+10％CSE(LacZ組)、GPX轉(zhuǎn)染+10％CSE(GPX組)干預(yù)。收集各組干預(yù)24h后細胞爬片及上清液，硫代戊巴比妥酸法測上清液MDA濃度，黃嘌呤氧化酶法測SOD活力，TUNEL法檢測細胞AI。 結(jié)果： 1.70MOI的Ad-LacZ轉(zhuǎn)染率高達(93.3±2.9)％。 2.10％CSE干預(yù)ECV304 24h后，其AI高于0％及5％CSE干預(yù)組，差

3、異有統(tǒng)計學(xué)意義(p均<0.05)。10％CSE干預(yù)ECV304 24h后，其AI高于0h、6h和12h組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p均<0.05)。 3.10％CSE干預(yù)ECV304 24h后，與空白組比較，其上清液中MDA濃度增加，SOD活力降低，且AI增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p均<0.05)。 4.腺病毒介導(dǎo)的GPX基因轉(zhuǎn)染后的ECV304，經(jīng)10％CSE干預(yù)24h后，與CSE組及LacZ組比較，其上清液中MDA濃度降低，

4、SOD活力增加，AI降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p均<0.05)。 5.所有四組細胞培養(yǎng)上清液中MDA濃度與AI呈正相關(guān)(r=0.913，p<0.05)，SOD活力與AI呈負相關(guān)(r=0.660，p<0.05)。 結(jié)論： 1.CSE能導(dǎo)致內(nèi)皮細胞氧化/抗氧化失衡及凋亡，其致凋亡作用呈時間及濃度依賴性。 2.腺病毒介導(dǎo)GPX基因轉(zhuǎn)染可以部分抑制CSE致內(nèi)皮細胞氧化/抗氧化失衡及凋亡作用。 3.ECV30