柑橘精油抗氧化特性及對皮膚細胞氧化損傷的保護作用研究.pdf

1、本研究從夏橙、椪柑、檸檬、蜜柑果皮中提取精油，對精油成分構(gòu)成進行差異分析，采用高速逆流色譜(HSCCC)分離椪柑精油主要成分;以兩種體外抗氧化測試方法評價柑橘精油及其主要成分的抗氧化特性;構(gòu)建人皮膚成纖維細胞氧化損傷模型以探究精油及活性成分對細胞的保護作用，以期為柑橘精油在護膚方向的應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。全文主要結(jié)果如下:
　　1.柑橘精油的提取分離及成分差異分析
　　采用壓榨法和水蒸汽蒸餾法提取果皮精油，以氣相色譜-質(zhì)譜

2、聯(lián)用(GC-MS)鑒定精油成分并進行差異分析。
　　(1)水蒸汽蒸餾法精油提取率高于壓榨法，且前者提取的精油成分中含氧化合物比例明顯高于壓榨精油。精油樣品中共鑒定出48種揮發(fā)性成分，不同柑橘品種和提取方法獲取的精油其成分構(gòu)成和相對含量都有所差異。α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯和金合歡烯在所有精油樣品中都被檢出，同時，每個品種精油都具有獨特的標記成份可區(qū)別于其它品種。
　　(2)采用高速逆流色譜法分離椪柑壓榨精油，篩選出石油醚-乙

3、腈-丙酮(5∶3∶2)作為溶劑體系，分離得到β-月桂烯、檸檬烯和γ-松油烯三種成分，其中β-月桂烯濃度由3.8％提高到64.9％，檸檬烯濃度由74.9％提高到87.1％，γ-松油烯濃度由9.7％提高到50.5％。
　　2.柑橘精油抗氧化特性評價
　　采用DPPH自由基清除法和TBARS法評價柑橘精油及十種主要成分的抗氧化特性。柑橘精油清除DPPH自由基的能力和抗脂質(zhì)過氧化能力呈現(xiàn)出濃度依賴性，四個品種中椪柑精油效果最優(yōu)。精油

4、的抗氧化活性與成分中萜烯化合物與含氧化合物的比值相關(guān)?？傮w上，柑橘精油及其活性成分在TBARS試驗中比在DPPH自由基清除試驗中表現(xiàn)出更低的EC50值。兩種單萜烯，γ-松油烯和萜品油烯在濃度為100μL/mL時，對DPPH自由基的清除率分別達到了75.8％和64.2％，其抗氧化指數(shù)分別為94.8％和88.2％，活性與抗氧化劑BHT接近。
　　3.柑橘精油對皮膚細胞氧化損傷的保護作用研究
　　(1)精油濃度＞0.3μL/mL時

5、會顯著降低細胞存活率，低于該濃度的精油整體上表現(xiàn)一定程度的細胞增殖作用。單體成分中除α-蒎烯和3-蒈烯對細胞有較大毒性外，其它成分表現(xiàn)出不同程度的細胞增殖作用，并確定以含量豐富且活性較高的檸檬烯和γ-松油烯進行后續(xù)實驗。
　　(2)以外源性過氧化氫構(gòu)建人皮膚成纖維細胞氧化損傷模型，采用MTT法研究過氧化氫對細胞存活率的影響。結(jié)果表明:過氧化氫能夠顯著降低細胞活力且與濃度正相關(guān)，根據(jù)細胞存活率結(jié)果最后確定氧化損傷誘導條件為:0.65

6、mM/0.33mM過氧化氫誘導6h。
　　(3)椪柑精油預(yù)處理對成纖維細胞的損傷有一定的防護作用，使細胞活力從54.9％增加到58.8-71.9％。而精油與過氧化氫共孵育試驗中，0.1μL/mLγ-松油烯表現(xiàn)出最佳的保護效果，使細胞活力從24.5％恢復(fù)到83.1％。兩組試驗中椪柑精油及其活性組分都顯著降低了細胞中MDA含量，且抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力得到不同程度的提高。揭示精油可能通過直接清除活性氧自由基而降低細胞