抗氧化乳酸菌的篩選及其對(duì)氧化損傷的CT-26細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：從乳酸發(fā)酵食品中分離篩選具有較高抗氧化活性的乳酸菌，研究其抗氧化能力并初步探討其作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)功能性乳制品提供理論依據(jù)。
　　 方法：以體外清除DPPH的能力為指標(biāo)，在相同菌量條件下，從32株受試菌株中篩選出具抗氧化活性的乳酸菌，正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化其發(fā)酵條件，以最大程度上提高其抗氧化水平。小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞CT-26傳代培養(yǎng)后分為對(duì)照組、模型組和乳酸菌干預(yù)組。模型組用含0.45mmol/LH2O2(終濃度)的RPMI-1640培養(yǎng)

2、基作用于細(xì)胞2h建立損傷模型，干預(yù)組將109cfu/mL的具抗氧化活性的乳酸菌與含0.45mmol/LH2O2的RPMI-1640培養(yǎng)基于37℃孵育3h，過(guò)濾除菌后取上清作用于細(xì)胞2h，分別測(cè)定各組細(xì)胞活力(MTT法)，測(cè)定上清液LDH、MDA及SOD含量，掃描電鏡觀察細(xì)胞表面形態(tài)，Hoechest33342染色檢測(cè)細(xì)胞核變化，HepG2細(xì)胞輔助驗(yàn)證受試菌對(duì)其保護(hù)作用。
　　 結(jié)果：從受試的32株乳酸菌株中，篩選得到一株具有較強(qiáng)

3、抗氧化能力的嗜酸乳桿菌874，DPPH清除率在35％左右。利用單因素實(shí)驗(yàn)，以發(fā)酵得到的菌體的DPPH清除率為指標(biāo)，從接種量、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、吐溫種類(lèi)、生長(zhǎng)因子種類(lèi)及添加量，碳、氮源種類(lèi)及添加量等多個(gè)方面對(duì)篩得菌株的生長(zhǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，并就碳、氮源及生長(zhǎng)因子(乳糖和豆芽汁)添加量等對(duì)清除DPPH自由基影響較大的因素進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，確定了篩得菌株的優(yōu)化培養(yǎng)基及最佳培養(yǎng)條件。優(yōu)化培養(yǎng)基成分為乳糖1％，豆芽汁12.5％，葡

4、萄糖2.5％，蛋白胨∶牛肉浸膏=1∶1，其余同MRS培養(yǎng)基。最佳培養(yǎng)條件為：接種量為3％，培養(yǎng)基初始pH值為6.4，37℃下發(fā)酵20h，吐溫-80作為促生長(zhǎng)因子。經(jīng)優(yōu)化后，菌株DPPH清除率由(35.15±0.49)％左右增至(66.70±0.42)％，清除羥自由基的能力由(19.60±0.99)％提高至(33.30±1.84)％，還原能力由(105.75±1.34)％增至(159.50±22.20)％。體外細(xì)胞培養(yǎng)研究結(jié)果表明：干預(yù)組

5、細(xì)胞活力顯著高于模型組(P＜0.01)，培養(yǎng)上清液中LDH及MDA含量顯著低于模型組(P＜0.01)，SOD含量高于模型組(P＜0.01)；掃描電鏡下模型組細(xì)胞表面微絨毛消失，出現(xiàn)大量凋亡小體，干預(yù)組形態(tài)接近正常；模型組經(jīng)Hoechst-33342熒光染色可見(jiàn)明顯的顆粒狀和固縮狀熒光，干預(yù)組呈彌漫均勻熒光。
　　 結(jié)論：篩選得到1株嗜酸乳酸菌，經(jīng)優(yōu)化其DPPH清除率達(dá)(66.70±0.42)％，羥自由基清除率為(33.30±1.