棕櫚酸誘導(dǎo)血管內(nèi)皮損傷及非諾貝特(酸)干預(yù)機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:
　　1.觀察高熱量高膽固醇飲食(HCD)能否誘導(dǎo)C57BL/6小鼠產(chǎn)生內(nèi)皮功能障礙及其病理學(xué)變化,以及非諾貝特(FF)是否具有相應(yīng)的保護(hù)作用。
　　2.研究棕櫚酸(PA)是否誘導(dǎo)小鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(MAEC)產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)及細(xì)胞凋亡,以及非諾貝特酸(FA)對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的ERS及細(xì)胞凋亡是否具有保護(hù)作用。
　　方法:
　　1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分:將小鼠隨機(jī)分為正常飲食組(SCD)、HCD組和HCD+非

2、諾貝特治療組,以3個(gè)月HCD飲食建立C57BL/6小鼠代謝綜合癥模型,非諾貝特灌胃治療2周。用葡萄糖耐量試驗(yàn)(GTT)和胰島素耐量試驗(yàn)(ITT)檢測(cè)各組胰島素敏感性。測(cè)定血清生化指標(biāo)TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA,炎性指標(biāo)TNF-α、MCP-1和IL-6,以及內(nèi)皮功能障礙指標(biāo)NO、ET-1的水平。電鏡觀察小鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)變化。TUNEL法檢測(cè)小鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的原位凋亡。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)部分:將體

3、外培養(yǎng)的MAEC分為正常對(duì)照組(NC),棕櫚酸組(PA),棕櫚酸+非諾貝特酸干預(yù)組(PA+FA高、中、低三個(gè)劑量組)。四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖率,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平和細(xì)胞凋亡率(AnnexinV-FITC/PI雙染法),免疫熒光法檢測(cè)CHOP的蛋白表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)定位,Western blot法檢測(cè)GRP78的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分:三個(gè)月HCD飲食后,H

4、CD組小鼠體重明顯高于正常組。ITT和GTT試驗(yàn)結(jié)果表明HCD組小鼠胰島素敏感性下降,非諾貝特治療組胰島素敏感性改善。電鏡觀察顯示HCD組小鼠胸主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中線粒體有明顯腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈泡狀結(jié)構(gòu)等病理改變,非諾貝特治療組較HCD組上述細(xì)胞器的變化明顯改善。TUNEL結(jié)果顯示HCD可誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡,非諾貝特可明顯減少其凋亡。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)部分:與NC組相比,PA對(duì)MAEC增殖有明顯的抑制作用,以0.5mmol/LPA

5、作用24h最明顯,FA中濃度組(50μmol/L)即對(duì)MAEC的增殖抑制有明顯的改善作用。PA使MAEC細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯升高,FA干預(yù)則能顯著降低活性氧水平。與NC組相比,0.5mmol/LPA使MAEC凋亡率明顯增加;中、高濃度FA組凋亡率明顯下降。與NC組相比,PA組CHOP的蛋白表達(dá)顯著增加,且主要分布在胞核,FA中、高濃度組CHOP表達(dá)明顯減少。PA可顯著誘導(dǎo)GRP78的蛋白表達(dá),中、高濃度FA則明顯減少GRP78的蛋白表達(dá)