內質網應激介導高脂飲食和棕櫚酸誘導的血管損傷及非諾貝特的干預.pdf

1、目的：
　　1.觀察高脂飲食（HFD）能否誘導SD大鼠胸主動脈血管環(huán)舒縮功能變化及其病理學改變，以及非諾貝特（FF）是否能夠保護血管。
　　2.研究棕櫚酸（PA）是否減弱正常雌性大鼠內皮依賴性血管舒張反應及誘導小鼠胸主動脈內皮細胞（MAEC）產生內質網應激(ERS)，以及非諾貝特酸（FA）的保護作用是否與緩解內質網應激有關。
　　方法：
　　1.體內實驗部分：依據隨機分配原則，將雌性大鼠隨機分為正常飲食組（SCD

2、）、高脂飲食組（HFD）和HFD加非諾貝特治療組（HFD+FF），以5個月高脂飲食建立SD大鼠高脂血癥模型，非諾貝特灌胃治療2個月。每周稱量大鼠體重，測定血清生化指標TG、TC、HDL-C、LDL-C，氣相色譜法（GC）檢測FFA、PA含量，硝酸還原酶法檢測內皮功能紊亂指示劑NO生成變化；HE染色研究胸主動脈病理學改變，Weigert染色檢測胸主動脈彈力纖維變化，油紅O染色檢測脂質沉積；RT-PCR分析胸主動脈中CHOP及GRP78基因

3、表達的改變；Western blot法檢測內質網應激標志物CHOP、GRP78的蛋白表達以及ERK、ERK磷酸化，JNK、JNK磷酸化和eNOS和eNOS的磷酸化水平變化；血管張力實驗觀察梯度濃度乙酰膽堿（ACh）對血管環(huán)的作用變化。
　　2.體外實驗部分：以正常雌性SD大鼠血管環(huán)為研究對象，不同濃度棕櫚酸和非諾貝特孵育，觀察棕櫚酸和非諾貝特對乙酰膽堿（ACh）誘導的血管舒張反應的影響。將體外培養(yǎng)的MAEC分為正常對照組（CON）

4、，4-PBA組（PBA），棕櫚酸組（PA），4-PBA+棕櫚酸組（PA），棕櫚酸+非諾貝特酸干預組（FA+PA），衣霉素陽性對照組（TM），MTT法研究棕櫚酸組和非諾貝特酸組細胞活力變化；硝酸還原酶法檢測非諾貝特對棕櫚酸作用后培養(yǎng)液NO生成的變化；RT-PCR分析各組CHOP，GRP78，IRE1α和XBP1-s基因水平變化；Western blot法檢測內質網應激標志物CHOP、GRP78的蛋白表達以及ERK、ERK磷酸化，JNK、J

5、NK磷酸化和eNOS和eNOS的磷酸化變化。
　　結果：
　　1.體內實驗部分：5個月HFD飲食后，與對照組比較①HFD組大鼠體重明顯高于SCD組；②HFD組大鼠血清TC、TG、LDL-C顯著增高，HDL-C顯著降低；③HFD組大鼠血清FFA、PA水平顯著高于正常組；④HFD組血清NO水平顯著高于對照組；⑤HE及Weigert染色顯示：HFD組胸主動脈管壁增厚，彈力纖維排列紊亂，局部有斷裂現象；⑥油紅O染色提示HFD組血管脂

6、質生成顯著增加；⑦HFD組胸主動脈組織CHOP和GRP78基因表達顯著增加；⑧CHOP、GRP78、ERK磷酸化及JNK磷酸化表達明顯高于SCD組，eNOS磷酸化表達顯著降低；⑨HFD組胸主動脈內皮依賴性血管舒張反應顯著降低；⑩非諾貝特灌胃治療2個月，與HFD組相比，顯著降低大鼠體重，逆轉血脂水平改變，明顯改善胸主動脈病理學變化，CHOP和GRP78基因表達顯著降低，各蛋白表達CHOP、GRP78、p-ERK、p-JNK明顯降低，p-e

7、NOS顯著增加；舒張反應明顯改善。
　　2.體外實驗部分：與CON組相比，①不同濃度PA作用正常雌性SD大鼠血管環(huán)3 h后，內皮依賴性血管舒張變化明顯減弱，以0.2mmol/L PA減弱最為明顯；內質網應激抑制劑4-PBA或FA預處理后，血管環(huán)舒張反應明顯改善；TM孵育血管環(huán)90min后，舒張反應顯著降低②不同濃度PA對MAEC活力明顯減弱，以0.5mmol/L PA作用24h最明顯；③PA處理顯著減少細胞上清液NO的水平，FA孵

8、育后逆轉PA作用下NO水平變化；④PA顯著誘導CHOP、GRP78、IRE1α、XBP1-s基因表達；⑤ CHOP、GRP78、p-ERK、p-JNK表達顯著增加，p-eNOS表達顯著降低；⑥內質網應激抑制劑4-PBA或FA預處理后，各基因表達顯著降低，CHOP、GRP78、p-ERK、p-JNK蛋白表達明顯降低，p-eNOS顯著增加；⑦內質網應激陽性對照物TM組CHOP、GRP78基因和蛋白水平均明顯升高。
　　結論：