非諾貝特改善糖尿病小鼠血管內(nèi)皮功能及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:糖尿病(DM)是影響人類健康的全球性公共問題，預(yù)計(jì)到2030年全球糖尿病患者將增至4.39億。糖尿病微血管并發(fā)癥(Microvascularcomplications)和大血管并發(fā)癥(Macrovascular complications)是糖尿病患者傷殘和死亡的重要原因。高血糖導(dǎo)致的內(nèi)皮功能障礙(Endothelial dysfunction)使血管舒張功能和收縮功能受損，破壞了血管的完整性。內(nèi)皮功能障礙被認(rèn)為是1型和2型糖

2、尿病的早期標(biāo)志，可用于血管疾病的獨(dú)立預(yù)測。因此，改善血管內(nèi)皮功能對于糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防和治療具有重要意義。
　　非諾貝特（FF）是過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)的激動(dòng)劑，臨床用于降血脂。2010年美國心臟病學(xué)學(xué)會(huì)公布的ACCORD(Action to Control Cardiovascular Risk in Diabetes)試驗(yàn)表明，非諾貝特聯(lián)合辛伐他汀的治療能降低伴血脂異常的2型糖尿病患者的心血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)。<

3、br>　　一氧化氮(NO)由內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)產(chǎn)生，參與調(diào)節(jié)血管功能，在炎癥和血管病變發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。NO的生物利用度取決于其產(chǎn)生和降解失活之間的平衡。糖尿病高血糖導(dǎo)致的高氧化應(yīng)激(OS)狀態(tài)使eNOS脫耦聯(lián)，超氧化陰離子(Superoxide onion，O2-)過度產(chǎn)生，導(dǎo)致NO生物利用度降低。另一方面，NO的生物利用度降低，使血小板聚集增強(qiáng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞對單核細(xì)胞粘附作用增加而導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙。
　　

4、腺苷單磷酸鹽激活蛋白激酶(AMPK)是高靈敏度的細(xì)胞代謝傳感器，可控制下游目標(biāo)蛋白eNOS的表達(dá)。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，激活A(yù)MPK可通過增加p-eNOS的表達(dá)改善血管功能障礙。本課題研究:非諾貝特是否能夠改善糖尿病小鼠內(nèi)皮依賴性舒張功能;非諾貝特是否能夠改善高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙;通過測定AMPK和eNOS磷酸化水平探索非諾貝特改善內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的可能機(jī)制。
　　研究方法:
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：雄性C57小鼠，4周齡，隨機(jī)分為三組

5、:對照組(Control)、糖尿病模型組貝特治療后能夠顯著改善糖尿病小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能障礙。非諾貝特對糖尿病小鼠主動(dòng)脈收縮功能無明顯影響;L-NAME消除非諾貝特對小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能的改善作用;非諾貝特對糖尿病小鼠主動(dòng)脈非內(nèi)皮依賴性舒張功能無明顯影響。這些結(jié)果提示:非諾貝特能夠改善糖尿病小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能。
　　1)非諾貝特降低糖尿病小鼠主動(dòng)脈O2-水平：與對照組相比，糖尿病模型組小鼠主動(dòng)脈中O2-水

6、平明顯上升，而非諾貝特治療組小鼠主動(dòng)脈O2-水平顯著降低。
　　2)非諾貝特對糖尿病小鼠主動(dòng)脈eNOS表達(dá)無明顯影響
　　3)蛋白檢測結(jié)果表明:eNOS和p-eNOS在對照組、糖尿病模型組，以及非諾貝特治療組的糖尿病小鼠主動(dòng)脈中的表達(dá)并無顯著差異。
　　2.非諾貝特能夠改善高糖誘導(dǎo)的MAECs功能障礙
　　1)MAECs的鑒定：用免疫熒光方法鑒定MAECs，血管性血友病因子(vWF)/Hoechst33258雙染

7、陽性的細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的82％。
　　2)非諾貝特減輕高糖誘導(dǎo)的MAECs粘附功能損傷：與對照組相比，高糖處理組的MAECs粘附能力明顯降低;非諾貝特處理后MAECs粘附能力顯著提高。
　　3)非諾貝特改善高糖誘導(dǎo)的MAECs小管形成功能障礙：與對照組相比，高糖處理組的MAECs小管形成能力明顯降低;非諾貝特處理后MAECs小管形成能力顯著提高。
　　4)非諾貝特阻止高糖誘導(dǎo)的MAECs內(nèi)NO表達(dá)下降：與對照組相比，高糖

8、處理組的MAECs內(nèi)NO水平明顯降低;非諾貝特處理后細(xì)胞內(nèi)NO水平顯著提高。
　　5)非諾貝特抑制高糖誘導(dǎo)的MAECs內(nèi)O2-表達(dá)：與對照組相比，高糖處理組的MAECs內(nèi)O2-水平明顯上升;非諾貝特處理后細(xì)胞內(nèi)O2-水平顯著降低。
　　6)非諾貝特促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的MAECs內(nèi)eNOS和AMPK磷酸化激活：與對照組相比，高糖處理組的MAECs內(nèi)p-eNOS和p-AMPK表達(dá)明顯降低;非諾貝特處理后細(xì)胞內(nèi)p-eNOS和p-AMPK