水稻開花基因RID1功能的初步研究.pdf

1、本實驗室此前已經(jīng)鑒定了一個水稻“不開花”突變體rid1，導(dǎo)致不開花的原因是由于T-DNA插入RID1(RiceindeterminateⅠ)基因位點,使得RID1基因的功能發(fā)生缺失所造成。本研究以此突變體材料為基礎(chǔ)，利用超量表達、特異性表達、原核表達及原位雜交技術(shù)來研究RID1基因的功能，為研究水稻開花機制提供依據(jù)。本研究獲得的主要研究結(jié)果如下：
　　 1.通過PCR方法獲得RID1基因組序列和全長cDNA序列，并克隆到超量表達

2、載體pu2301上，構(gòu)建的超表達載體分別命名為Ubq:RID1g和Ubq:RID1c；通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，分別得到109和80株T0代再生植株，PCR陽性檢測顯示，Ubq:RID1g中陽性植株20株，其中9株恢復(fù)抽穗表型；Ubq:RID1c中陽性植株7株，其中6株恢復(fù)抽穗表型。說明我們構(gòu)建的超量表達載體有功能，RID1cDNA序列有效。
　　 2.通過RT-PCR方法檢測了Ubq:RID1g和Ubq:RI

3、D1c轉(zhuǎn)化得到的陽性植株中抽穗期基因RID1、Ehd1、Hd1、Hd3a、RFT1的表達量。結(jié)果顯示恢復(fù)抽穗表型的轉(zhuǎn)基因陽性植株中RID1基因都得到了超量表達；同時，還得到了兩個恢復(fù)抽穗表型的轉(zhuǎn)基因陰性植株，分別是Ubq:RID1g中的＃68和Ubq:RID1c中的＃27，在這兩個植株中，RT-PCR檢測不到RID1基因的表達。通過RT-PCR還檢測了植株＃27Ti代12個單株中RID1的表達情況，結(jié)果顯示：Ti代12個植株中都檢測不到

4、RID1基因的表達，但都能檢測到開花關(guān)鍵基因Hd3a的表達，且Ti代12個單株全部恢復(fù)抽穗表型，沒有出現(xiàn)表型分離。
　　 3.利用葉片特異性啟動子Hd3a，構(gòu)建了載體Hd3a::RID1c，轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，得到T0代再生植株41株，陽性植株10株，其中有2株恢復(fù)抽穗，RT-PCR檢測了陽性植株＃28中RID1的表達譜，結(jié)果顯示在植株＃28的葉片、葉鞘、莖、根中都能檢測到RID1的表達，表明RID1表達不特異。
　　

5、 4.利用分生組織特異性啟動子Osh1，構(gòu)建了載體Osh1::RID1c，轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，得到T0代再生植株8株，陽性植株7株，所有陽性植株都恢復(fù)抽穗，RT-PCR檢測了陽性植株＃6中RID1的表達譜，結(jié)果顯示在植株＃6的葉片、葉鞘、莖、頂端組織中都能檢測到RID1的表達，表明RID1表達不特異。
　　 5.利用維管組織特異性啟動子Rpp16，構(gòu)建了載體Rpp16::RID1c，轉(zhuǎn)化rid1突變體愈傷，得到T0代再生植

6、株31株，陽性株有19株，其中9株恢復(fù)抽穗表型，RT-PCR檢測了陽性植株＃8中RID1的表達譜，結(jié)果顯示在植株＃8中，在富含維管束組織的葉片、葉鞘、莖中都能檢測到RID1的表達，而在不含維管束組織的頂端分生組織和根中檢測不到或只能檢測到微量表達。我們還通過RT-PCR檢測了T0代再生陽性植株中抽穗期基因的表達情況，結(jié)果表明RID1基因在微管組織中特異表達可以促進水稻抽穗，且能正調(diào)控其他抽穗期基因的表達。
　　 6.構(gòu)建了表達載