大鼠煙氣亞慢性暴露的蛋白水平差異表達(dá)研究.pdf

1、目的：本研究主要通過(guò)構(gòu)建亞慢性暴露的大鼠模型來(lái)探究吸煙等因素對(duì)機(jī)體的影響，尤其是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。
　　方法：首先采用160只W is ta r大鼠構(gòu)建煙氣染毒模型，將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成10％香煙煙氣濃度的低劑量組、20%煙氣濃度的中劑量組、60%煙氣濃度的高劑量組和對(duì)照組，染毒周期分別為3個(gè)月和6個(gè)月。然后分離大鼠的肺組織并將大鼠肺癌組織中蛋白質(zhì)胰酶處理后進(jìn)行蛋白質(zhì)篩選和鑒定，iTRAQ進(jìn)行定量分析，對(duì)照組(CM)、低

2、劑量染毒組(LM)、中劑量染毒組(MM)、高劑量染毒組(HM)，所提取的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)FASP酶解、iTRAQ試劑標(biāo)記、高pHRPLC分離、RPLC-MS分離分析，獲取的串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過(guò)軟件搜庫(kù)進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了大鼠的煙氣亞慢性暴露模型，在通過(guò)質(zhì)譜分析的數(shù)據(jù)中共收集到340258個(gè)光譜、19094個(gè)多肽和4483個(gè)蛋白。并根據(jù)肽段分子量的大小進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分布的分析。通過(guò)蛋白的定量分析發(fā)現(xiàn)，不同劑量組之間的蛋白在表達(dá)水平的

3、上有明顯的差異。通過(guò)對(duì)蛋白進(jìn)行聚類(lèi)分析發(fā)現(xiàn)，和對(duì)照組相比，3個(gè)染毒組樣本的上調(diào)或者下調(diào)有一定的劑量依賴(lài)性。GO功能的注釋聚類(lèi)分析發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)主要集中在三個(gè)方面：分子功能、細(xì)胞位置、生物過(guò)程等；而C0G的注釋分析發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)可以被歸為26個(gè)簇中。通過(guò)KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行通路富集分析發(fā)現(xiàn)，3個(gè)不同劑量組與對(duì)照組相比，在不同數(shù)量的信號(hào)通路有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：論文首先對(duì)W is ta r大鼠進(jìn)行構(gòu)建煙氣亞慢性模型，分為三個(gè)劑量組和

4、對(duì)照組，構(gòu)建成功后取大鼠的肺組織，分離提取蛋白質(zhì)，進(jìn)行蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，和對(duì)照組相比，三個(gè)不同劑量組的蛋白質(zhì)有明顯的差異性表達(dá)。這些差異蛋白質(zhì)在功能上主要涉及到蛋白質(zhì)代謝、PPAR信號(hào)通路，這些差異性的蛋白除了會(huì)影響肺部疾病之外，還影響到肥大性心肌病、擴(kuò)張性心肌病、心肌收縮等，同時(shí)我們的研究還發(fā)現(xiàn)，這些蛋白質(zhì)的差異存在一定程度上的依賴(lài)性。此蛋白質(zhì)質(zhì)譜方面的研究吸煙誘發(fā)的肺部疾病的機(jī)制方面的探索提供新的線索，同時(shí)也為尋找