亞慢性砷暴露對小鼠腦組織線粒體Sdha表達影響.pdf

1、目的：研究亞慢性砷暴露對小鼠腦組織線粒體復合體ⅡSdha的表達影響，為探討砷的神經毒性機制提供分子毒理學依據(jù)。 方法：SPF級小鼠50只，雌雄各半，體重26.3-30.9g。按體重將小鼠隨機分為5組：1ppm三氧化二砷（As2O3）染毒組；4ppmAs2O3染毒組；牛磺酸抗氧化干預組（4ppmAs2O3+150mg/L?；撬幔┖途S生素C抗氧化干預組（4ppmAs2O3+45mg/L維生素C）；蒸餾水對照組。動物自然飲水和飲食，室

2、溫18～25℃。通過飲用含不同濃度As2O3蒸餾水的方式使小鼠暴露于砷。保護劑是以灌胃方式投給，每星期2次。連續(xù)染毒60天，頸椎脫臼法處死小鼠。應用免疫組織化學8一羥基脫氧鳥嘌呤（8-OH-dG）實驗檢測小鼠腦組織氧化性損傷。應用電鏡技術觀察砷暴露小鼠腦組織線粒體的超微結構變化。應用基因芯片技術篩選染砷小鼠腦組織線粒體呼吸鏈復合體差異表達的相關基因。用westernblot方法驗證線粒體復合體ⅡSdha的蛋白表達。通過比色法觀察砷對SD

3、H的酶活性影響。 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，用單因素方差分析（ANOVA），比較各染砷組與對照組間的統(tǒng)計學差異，以P<0.05表示統(tǒng)計學差異顯著。 結果：與對照組比較，4ppm染砷組小鼠腦組織出現(xiàn)明顯的8-OH-dG表達，而對照組未見8-OH-dG表達。電鏡結果顯示，對照組小鼠腦組織線粒體雙層膜結構完整，嵴清晰可見。染砷組小鼠腦組織線粒體雙層膜結構完整，線粒體腫脹，部分嵴消失或斷裂，線粒體出現(xiàn)空泡變。基因芯片篩選結果

4、顯示：染砷組小鼠腦組織線粒體呼吸鏈復合體差異表達的相關基因共11條，其中表達下調的基因10條，分別為NADH-泛醌還原酶基因（Ndufab1，Ndufb12，andNdufb2），琥珀酸-泛醌還原酶基因（Sdha），泛醌-細胞色素C還原酶基因（Uqcr），細胞色素C氧化酶基因（Cox6a2，Cox17），ATP合酶基因（Atp5a1，Atp5g1，Atpif1）。表達上調的基因為NADH-泛醌還原酶基因（Ndufs4）。小鼠腦組織線粒體

5、復合體ⅡSdha的westernblot結果顯示：Sdha蛋白表達量隨著染砷劑量的增加其蛋白表達量明顯減少，尤其在4ppm染砷組最為明顯。在干預組（?；撬岷途S生素C），線粒體復合體ⅡSdha蛋白表達量比4ppm染砷組明顯增多。線粒體復合體ⅡSdha蛋白表達量隨著染砷天數(shù)的增多而降低。染砷組小鼠腦組織SDH酶活性低于對照組，且隨染砷濃度的增高而降低，尤其4ppm染砷組SDH酶活性降低最為明顯（P<0.05）。在?；撬岷途S生素C干預組，小鼠