幽門(mén)螺桿菌HpaA-VacA融合蛋白卵黃抗體的制備及生物活性研究.pdf

1、目的：通過(guò)基因工程方法構(gòu)建幽門(mén)螺桿菌黏附素（ HpaA）、細(xì)胞空泡毒素（VacA）及HpaA-VacA融合蛋白作為免疫原，免疫蛋雞制備特異性卵黃抗體（IgY），并研究其生物活性，為Hp感染的治療與預(yù)防開(kāi)辟了一條新路徑，同時(shí)也為制備抗Hp感染的制劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法與結(jié)果：1.采用PCR方法分別克隆幽門(mén)螺桿菌HpaA、VacA及HpaA-VacA融合基因?？寺≥d體酶切和測(cè)序結(jié)果均顯示，Hp HpaA、VacA和HpaA-VacA融

2、合基因成功克隆到pGEM-3Z質(zhì)粒中。2.通過(guò)DNA重組技術(shù)分別構(gòu)建Hp HpaA、VacA和HpaA-VacA融合基因的原核表達(dá)系統(tǒng)。SDS-PAGE結(jié)果表明，以上原核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功，且HpaA、VacA和HpaA-VacA融合蛋白均高效表達(dá)。3.通過(guò)親和層析法純化HpaA、VacA及HpaA-VacA融合蛋白，SDS-PAGE分析其純度，Western blot鑒定其免疫學(xué)活性。結(jié)果顯示，純化后的三種重組蛋白純度均達(dá)到90％以上，

3、且均能夠被Hp感染病人的血清所識(shí)別，即三種融合蛋白都具有良好的免疫學(xué)活性。4.以純化的HpaA、VacA及HpaA-VacA融合蛋白分別免疫蛋雞，分離提純IgY，鑒定其生物學(xué)活性。SDS-PAGE測(cè)定IgY純度均為85％左右；Western blot顯示IgY都具有良好的免疫特異性即能與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合；間接ELISA結(jié)果顯示，HpaA-IgY效價(jià)為1:12800；VacA-IgY效價(jià)為1:12800；HpaA-VacA-IgY