P2Y2受體、HuD蛋白在中高位肛門直腸畸形患兒直腸末端的表達及意義.pdf

1、目的：觀察HuD蛋白和P2Y2受體在中高位ARM患兒直腸末端以及正常結腸的表達情況，探討其對ARM患兒腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響。
　　方法：收集我院2014年7月至2016年1月手術治療中高位ARM患兒直腸末端標本15例（畸形組），其中腹腔鏡輔助一期肛門成形7例，年齡為2天-5月，男孩5例，女孩2例，分期肛門成形8例，男孩6例，女孩2例，其中降結腸造瘺7例，橫結腸造瘺1例，造瘺年齡為2-5天，二期手術時間為造瘺術后2-6月（其中后矢狀

2、入路肛門成形術3例,經(jīng)腹會陰肛門成形術5例），肛門成形時同時閉瘺，并取直腸末端標本。正常結腸腸管標本10例（正常對照組），其中腸套疊腸壞死（回結型）二期閉瘺術中取橫結腸4例，高位無肛患兒二期閉瘺術取近端造瘺的降結腸5例，絞窄性腸梗阻造瘺術閉瘺時取降結腸1例。運用蘇木素/伊紅（HE）染色計數(shù)ARM直腸末端和正常腸管黏膜下及肌間神經(jīng)叢數(shù)量，免疫組織化學（IHC）、免疫熒光、western bloting等實驗方法檢測HuD蛋白及P2Y2受體

3、的表達情況。并對15例ARM患兒術后隨訪，隨訪時間為4月-1年，平均隨訪時間5月，并采用Kelly評分評估肛門功能。
　　結果：1、HE染色：對照組腸管黏膜下及肌間神經(jīng)叢分布密集，數(shù)量多，節(jié)細胞數(shù)量多且發(fā)育正常，畸形組神經(jīng)叢數(shù)量稀疏濃縮成團塊狀且神經(jīng)纖維細小，中高位ARM畸形組腸管較正常腸管神經(jīng)叢分布明顯減少，對照組神經(jīng)叢與畸形組神經(jīng)叢比較（7.30±1.26比1.20±0.73，兩組比較P<0.01）；
　　2、免疫組化結

4、果：P2Y2受體和HuD蛋白主要表達在腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢，陽性顯色為淡黃色至棕褐色，主要表達在胞漿，HuD蛋白在細胞核中也明顯表達。P2Y2受體和HuD蛋白在ARM直腸末端的表達明顯低于在正常腸管中的表達，其積分光密度（IOD值）分別為（18.83±3.65比8.49±2.68；43.48±7.11比3.70±1.21，兩組比較P＜0.01）；
　　3、Western bloting結果：畸形組腸管組織中HuD蛋白和P2Y

5、2受體蛋白表達量均低于正常組腸管，蛋白表達量別為(1.13±0.32比0.49±0.08；0.92±0.18比0.36±0.09，兩組比較P<0.05）；
　　4、免疫熒光化學結果：經(jīng)免疫熒光化學染色后可見正常腸管 P2Y2受體和HuD蛋白在腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢表現(xiàn)明亮的綠色熒光，神經(jīng)叢形態(tài)規(guī)整?；谓M神經(jīng)叢染色暗淡或無染色，形態(tài)各異，其IOD值分別為(78.13±7.86比26.56±5.32；96.56±17.38比22

6、.32±4.36，兩組比較P＜0.01）；
　　5、肛門功能隨訪結果：優(yōu)8例，良5例，差2例，優(yōu)良率為87.7％，其中肛門表現(xiàn)功能差的兩例P2Y2受體、HuD蛋白表達均低。
　　結論：
　　①、HuD蛋白和P2Y2受體在正常結腸均有表達，主要表達在腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢，表達在神經(jīng)節(jié)細胞胞漿，同時HuD蛋白在神經(jīng)節(jié)細胞胞核中也明顯表達；
　?、?、ARM患兒直腸末端HuD蛋白和P2Y2受體的表達均低于正常腸管；