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文檔簡介
1、目的:探討腸球菌心內(nèi)膜炎抗原efaA與腸球菌生物膜形成之間的相關(guān)性,為深入研究腸球菌生物膜的致病性及耐藥性奠定基礎。
方法:
1.利用普通光學顯微鏡觀察efaA+、efaA-糞腸球菌在玻片上的生物膜形成過程,初步判定腸球菌生物膜形成各階段的時間點;
2.微量滴定板法比較efaA+、efaA-糞腸球菌的生物膜形成能力:細菌接種至96孔板中,培養(yǎng)不同時間后棄去培養(yǎng)液,結(jié)晶紫染色,乙醇-丙酮混合液溶解
2、,酶標儀測定比較不同階段efaA+、efaA-菌的OD570值;
3.MTT法比較efaA+、efaA-糞腸球菌生物膜的活菌含量:細菌接種至96孔板中,培養(yǎng)不同時間后棄去培養(yǎng)液,MTT孵育后DMSO溶解,酶標儀測定比較不同階段efaA+、efaA-菌的OD492值;
4.共聚焦激光掃描顯微鏡觀察比較efaA+、efaA-糞腸球菌所形成的生物膜:各菌株在玻片上形成生物膜,AO/EB染色后CLSM觀察,比較efa
3、A+、efaA-菌所形成生物膜的厚度及生物膜內(nèi)層、中層、外層的細菌密度和活菌比例,并做統(tǒng)計學分析。
5. 采用SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR,檢測efaA+、efaA-糞腸球菌在細菌培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)不同時間后所形成生物膜的efaA mRNA的表達,與生物膜的厚度變化進行對比。
結(jié)果:
1.腸球菌生物膜黏附期為2h,基本形成期為6h,成熟期為24h,播散期為48h。
2.微量滴
4、定板法比較生物膜形成能力,efaA+糞腸球菌在各培養(yǎng)時間點的OD570均大于efaA-菌,即efaA+糞腸球菌的生物膜形成能力比efaA-菌的強;
3.MTT法比較生物膜不同階段的活菌含量(OD492),efaA+糞腸球菌在各培養(yǎng)時間點的OD492均大于efaA-菌,即efaA+糞腸球菌所形成的生物膜的活菌數(shù)比efaA-菌的多;
4.共聚焦激光顯微鏡觀察,efaA+糞腸球菌在不同階段所形成的生物膜的厚度、細菌
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