江蘇省雞源彎曲菌耐藥性檢測及整合子分析.pdf

1、彎曲菌（Campylobacter）是重要的食源性病原菌。家禽是彎曲菌的重要宿主，在家禽養(yǎng)殖過程中藥物的廣泛使用導致多重耐藥彎曲菌出現(xiàn)并可通過食物鏈傳遞，對食品安全和人類健康構成重大威脅。本研究將調(diào)查江蘇省雞源彎曲菌流行情況及其抗生素和消毒劑的耐藥性特征，在此基礎上探究整合子介導彎曲菌共同耐藥的作用。
　　采集江蘇省揚州、鹽城等七市及其區(qū)縣的不同規(guī)?；B(yǎng)雞場、農(nóng)貿(mào)市場和超市的雞泄殖腔和雞肉樣品共1022份，采用紙片擴散法（K-B法

2、）測定10大類27種抗菌藥物敏感性，平板稀釋法測定彎曲菌對兩種消毒劑苯扎氯銨(BC)和十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)耐受性，PCR檢測彎曲菌中季銨鹽類消毒劑耐藥基因。結果顯示:(1)分離得到312株彎曲菌，總分離率為30.5％，其中空腸彎曲菌228株，結腸彎曲菌84株。(2)分離株對抗菌藥物耐藥水平不一，對β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類和氨基糖苷類高度耐藥。耐藥率超過80％的有頭孢噻肟、頭孢曲松、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、甲氧芐氨

3、嘧啶和林可霉素;超過50％的有氨芐西林、阿莫西林、頭孢拉定、卡那霉素、妥布霉素、氧氟沙星、萘啶酸、恩諾沙星、復方新諾明和四環(huán)素;分離株對亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、紅霉素、阿奇霉素、氯霉素、氟苯尼考和磷霉素等藥物敏感。(3)彎曲菌對消毒劑BC的MIC值范圍為0.125～64mg/L，對CTAB的MIC值范圍為0.125～1024mg/L，對消毒劑CTAB的耐受能力顯著大于BC(P＜0.01)，僅檢出耐藥基因qacEdelta1(8.8

4、％)。
　　PCR擴增分離株中1型整合酶（int1）及3'端保守區(qū)(3'-CS)和2型整合酶（int2）基因，選擇代表性菌株進行MLST分型研究。結果表明:(1)312株彎曲菌中，共檢出int1陽性菌株126株，3'-CS陽性菌株58株（空腸彎曲菌40株，結腸彎曲菌18株）;int2陽性菌株7株。(2)MLST分型表明，72株細菌屬于30個不同ST型，61株細菌產(chǎn)生33個新的等位基因組合，其中以ST-1213(6％)和ST-425

5、8(6％)最為普遍;等位基因值數(shù)量最多的是pgm和tkt均為25個;UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic means)聚類分析得到6大類群，其中GroupⅤ包括了122株細菌，ST型有56種，包括已知和未知ST型，菌株來源多樣。
　　探究58株1型整合子完整菌株可變區(qū)基因盒結構。采用自然轉(zhuǎn)化法將整合子-基因盒完整菌株DNA接合到空腸彎曲菌NCTC11168;采用SDS

6、進行整合酶消除，檢測耐藥表型和基因盒變化情況。結果表明:(1)15株彎曲菌可變區(qū)均捕獲編碼氨基糖苷類抗生素耐藥基因aadA1，包括10株空腸彎曲菌和5株結腸彎曲菌，15株彎曲菌對氨基糖苷類抗生素和消毒劑CTAB、BC表現(xiàn)出共同耐藥。(2)自然轉(zhuǎn)化成功率為40％，轉(zhuǎn)化成功后的NCTC11168菌株能夠檢測出完整1型整合子結構，且耐藥表型發(fā)生變化。(3)經(jīng)過化學處理后，隨著整合子-基因盒的消除，部分氨基糖苷類藥物耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn)，但鏈霉素和卡