Ⅰ類整合子介導(dǎo)糞腸球菌多重耐藥性的研究.pdf

1、糞腸球菌是人和動(dòng)物腸道內(nèi)的正常菌群之一，為一種重要的條件致病菌，常作為細(xì)菌耐藥性的“指示菌”。隨著抗菌藥物在畜牧業(yè)生產(chǎn)中的廣泛使用，使得糞腸球菌對(duì)不同抗菌藥物的耐藥性呈逐年上升趨勢(shì)，使其臨床治療變得棘手。同時(shí)，關(guān)于糞腸球菌耐藥機(jī)制的研究，以及整合子是否已經(jīng)參與到糞腸球菌多重耐藥性的傳播中，已經(jīng)成為亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。為此，本研究以動(dòng)物源糞腸球菌作為對(duì)象，采用常規(guī)微生物學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法，對(duì)分離株進(jìn)行鑒定，篩選多重耐藥菌株，檢測(cè)分離株中

2、Ⅰ類整合子的攜帶，查明其可變區(qū)所攜帶的耐藥基因盒，初步分析其參與傳播糞腸球菌多重耐藥性的機(jī)制，為控制糞腸球菌耐藥性的傳播提供理論依據(jù)。
　　1.動(dòng)物源糞腸球菌的分離、鑒定
　　采用常規(guī)微生物學(xué)方法，對(duì)194份動(dòng)物源糞便及肛拭中的可疑腸球菌進(jìn)行分離純化，對(duì)其形態(tài)學(xué)特性、培養(yǎng)特性、生理生化特性和分子生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定，共分離鑒定到285株糞腸球菌，其中豬、牛、羊、馬、雞和蜣螂源糞腸球菌分別為49株、20株、174株、17株、21

3、株、4株。
　　2.動(dòng)物源糞腸球菌耐藥表型及基因型的檢測(cè)
　　采用CLSI（2014年）推薦的K-B擴(kuò)散法，選擇8種臨床常用抗生素，檢測(cè)分析285株糞腸球菌的耐藥表型及多重耐藥性。結(jié)果表明：285株糞腸球菌對(duì)青霉素的耐藥率最高為92.28％，其次是鏈霉素82.11%、阿莫西林64.91%、紅霉素54.04%、四環(huán)素45.26%和環(huán)丙沙星40.00%，對(duì)呋喃妥因、氨芐西林表現(xiàn)為高敏。其中有265株表現(xiàn)出多重耐藥，5重耐藥糞腸球

4、菌占31.39%（91/285），6重耐藥占26.67%（76/285）和4重耐藥占15.09%（43/285），7重耐藥及其以上耐藥占7.02%（20/285）。
　　285株糞腸球菌對(duì)9種耐藥基因的PCR檢測(cè)結(jié)果表明，β-內(nèi)酰胺類耐藥基因tem檢出率最高達(dá)77.89%，其次是四環(huán)素類tetM基因?yàn)?3.68%，喹諾酮類gyrA基因?yàn)?7.54%和ParC34.74%。氨基糖苷類耐藥基因以aph(3')-Ⅲ基因檢出率最高為22.

5、46%，其次是aac(6')/aph2''基因?yàn)?0.88%和ant(6')-Ⅰ基因?yàn)?.42%，未檢出mefA基因。
　　3.動(dòng)物源糞腸球菌多重耐藥性與Ⅰ類整合子的相關(guān)性研究
　　采用PCR檢測(cè)結(jié)合序列分析的方法，對(duì)分離株中攜帶的Ⅰ類整合子及其耐藥基因盒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，265株多重耐藥糞腸球菌的Ⅰ類整合酶intI基因的陽(yáng)性率為36.60%，3′-保守端qacE△1-sul1基因檢出率為71.13%，擴(kuò)增出31株耐藥基因

6、盒插入?yún)^(qū)，檢出率為31.96%，31株均攜帶有aadA2編碼氨基糖苷類耐藥基因盒，其與氨基糖苷類藥物的耐藥表型與基因型（aph(3')-Ⅲ、aac(6')/aph2''、ant(6')-Ⅰ）具有高度相關(guān)性，但并非唯一因素，未發(fā)現(xiàn)與其他抗生素耐藥機(jī)制相關(guān)的基因盒。
　　研究結(jié)果表明，石河子周邊地區(qū)動(dòng)物源糞腸球菌多重耐藥性現(xiàn)象較為嚴(yán)重，Ⅰ類整合子已經(jīng)參與到其耐藥基因的傳播中。研究結(jié)果揭示本地區(qū)畜牧生產(chǎn)中應(yīng)加大對(duì)動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)，