整合子與不同來(lái)源沙門(mén)菌株耐藥性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過(guò)比較不同來(lái)源沙門(mén)菌株的耐藥性差異、耐藥酶攜帶情況、Ⅰ類(lèi)整合子攜帶率和整合子上耐藥基因攜帶情況，分析其相互之間的關(guān)系，探討整合子在細(xì)菌耐藥性的獲得和傳遞中的作用，為預(yù)防和控制食源性疾病，指導(dǎo)臨床合理用藥，制定干預(yù)細(xì)菌多重耐藥性的產(chǎn)生及播散措施提供一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.沙門(mén)菌株的收集與鑒定
　　 共收集了133株不同來(lái)源的沙門(mén)菌：健康從業(yè)人員腸道內(nèi)分離菌株（健康攜帶株）111株

2、：其中2005年為45株，2007年為66株；食品中毒標(biāo)本中分離菌株（食品株）8株；臨床標(biāo)本分離菌株（感染株）14株。對(duì)收集到的菌株首先依據(jù)通用規(guī)范（GB/T4789.4-2003），用沙門(mén)菌屬診斷血清進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定，再使用腸桿菌鑒定系統(tǒng)API20E進(jìn)行復(fù)核鑒定，確保全部菌株均為沙門(mén)菌。
　　 2.不同來(lái)源的沙門(mén)菌株的耐藥性及耐藥酶的檢測(cè)
　　 對(duì)收集的菌株采用Kerby-Bauer紙片擴(kuò)散法進(jìn)行了6大類(lèi)共15種抗菌

3、藥物的敏感性測(cè)定；對(duì)耐3代頭孢菌素的菌株，采用雙紙片協(xié)同試驗(yàn)檢測(cè)了ESBLs攜帶情況，采用抗菌藥物及抑制劑組合耐藥表型篩選法檢測(cè)了AmpC酶的攜帶情況。
　　 3.不同來(lái)源的沙門(mén)菌株的Ⅰ類(lèi)整合子檢測(cè)
　　 采用PCR方法，對(duì)收集的菌株進(jìn)行了Ⅰ類(lèi)整合子篩選。在確認(rèn)了Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性菌株的基礎(chǔ)上，對(duì)其整合的耐藥基因盒進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物純化后進(jìn)行測(cè)序，序列分析后對(duì)耐藥基因盒的種類(lèi)及其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　

4、　 1.標(biāo)本的生物學(xué)特性：133株實(shí)驗(yàn)菌株的氧化酶均為陰性；A-F多價(jià)O抗原血清凝集全部為陽(yáng)性；血清分型共得到36個(gè)血清型，其中占前6位的為：德?tīng)柋吧抽T(mén)菌、山夫登堡沙門(mén)菌、豬霍亂沙門(mén)菌、阿哥納沙門(mén)菌、明斯特沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌，分別占14.3％、12.0％、10.5％、9.8％、6.0％和3.8％。菌株的API編碼以6704752和6704552為主，分別占47.4％和36.1％。
　　 2.藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果：健康攜帶株、食品

5、株和感染株對(duì)兩種或兩種以上抗菌藥物的耐藥率分別為9.91％、12.50％和57.14％，對(duì)單一抗菌藥物以鏈霉素耐藥率最高，而對(duì)頭孢菌素類(lèi)藥物較為敏感。
　　 2.1111株健康攜帶株對(duì)兩種或兩種以上抗菌藥物的耐藥率2007年高于2005年，分別為12.12％和6.67％。健康攜帶株對(duì)四環(huán)素與鏈霉素耐藥率最高，均為13.51％，但對(duì)鏈霉素耐藥中介率高達(dá)65.77％。
　　 2.28株食品株對(duì)萘啶酸耐藥率最高，為37.5％，

6、其次對(duì)四環(huán)素的耐藥率為25％，對(duì)鏈霉素中介率達(dá)37.5％。
　　 2.314株感染株對(duì)各種抗菌藥物耐藥率由高到低的順序?yàn)椋狠拎に幔?6.67％），鏈霉素（46.67％），四環(huán)素（40％），氨芐西林與甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲基異惡唑（33.33％），頭孢噻呋與氯霉素（26.67％），頭孢噻吩、頭孢曲松鈉、慶大霉素、卡那霉素為（13.33％）。可見(jiàn)感染株耐藥性較腸道株與食品株明顯增強(qiáng)。所有菌株對(duì)頭孢西丁的耐藥率為0；耐3代頭孢菌素的菌株

7、對(duì)碳青酶烯類(lèi)抗菌藥物亞胺培南（IPM）的耐藥率均為0。
　　 3.超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）與AmpC酶的檢測(cè)結(jié)果：健康攜帶株、食品株和感染株的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶攜帶率分別為0、12.5％和7.1％； AmpC的攜帶率均為0。
　　 4.整合子檢測(cè)結(jié)果：健康攜帶株、食品株和感染株的整合子攜帶率為9.91％、12.50％和71.43％。整合子陽(yáng)性菌株耐藥基因盒陽(yáng)性率分別為5.41％、0和50％；基因盒的種類(lèi)分別是編碼

8、耐磺胺類(lèi)藥物甲氧氨芐嘧啶的基因盒dfrA15、dhfrⅫ、編碼耐氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物四環(huán)素的基因盒aadA1、耐鏈霉素-壯觀霉素的基因盒aadA2和一個(gè)功能未知的基因盒orfF。
　　 4.1111株健康攜帶株中有11株為Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性，攜帶率為9.91％，其中6株細(xì)菌整合子攜帶有耐藥基因盒，除第13號(hào)多耐株攜帶3種耐藥基因盒：orfF、aadA2、dhfrⅫ外，其余5株僅檢出一個(gè)基因盒aadA2。Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性率2007年（23

9、.08％）高于2005年（6.67％）。
　　 4.2食品株中的多耐株：耐13種抗菌藥物的114號(hào)菌只檢測(cè)出Ⅰ類(lèi)整合子但未檢測(cè)出耐藥基因盒。
　　 4.314株感染株中10株為Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性株，其中7株攜帶耐藥基因盒，耐藥基因盒種類(lèi)有5種：aadA1、aadA2、dhfrⅫ、dfrA15和orfF。感染株中耐3或3種以上抗菌藥物的8株中有5株為Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性株，占62.5％。整合子陽(yáng)性率和耐藥基因盒的種類(lèi)都較健康攜帶株與

10、食品株更高、更復(fù)雜。
　　 結(jié)論：
　　 1.臨床感染株的耐藥性及整合子陽(yáng)性率均高于食品株和健康攜帶株；2007年分離的健康攜帶株耐藥性與整合子陽(yáng)性率均高于2005年。表明沙門(mén)菌的耐藥性在逐年增加，提示了監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥性的迫切性，以及合理應(yīng)用抗菌藥物的必要性。
　　 2.三種來(lái)源的沙門(mén)菌株的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）攜帶率也是臨床感染株與食品株高于健康攜帶株，與耐藥性一致，表明細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與其所處環(huán)境中的

11、抗菌藥物壓力相關(guān)。
　　 3.全部菌株對(duì)亞胺培南敏感，AmpC酶攜帶率為零。提示耐三代頭孢菌素的沙門(mén)菌感染可選用加酶抑制劑的三代頭孢菌素和亞胺培南進(jìn)行治療。
　　 4.感染株整合子陽(yáng)性率和耐藥基因盒的種類(lèi)都較健康攜帶株與食品株更高、更復(fù)雜，這與細(xì)菌的耐藥性、耐藥酶檢測(cè)結(jié)果一致，證明了整合子捕獲耐藥基因盒與抗菌藥物的選擇壓力有關(guān)，整合子介導(dǎo)了細(xì)菌耐藥的水平傳播，在細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生中具有重要作用。篩查細(xì)菌整合子的攜帶情況，能