健康人腸道大腸埃希菌耐藥性與Ⅰ類整合子關(guān)系的研究.pdf

1、目 的 了解我國深圳地區(qū)健康人腸道大腸埃希菌的耐藥水平；研究I類整合子在健康人腸道大腸埃希菌中的存在頻率；分析I類整合子攜帶的耐藥基因與耐藥表型之間的關(guān)系；研究I類整合子在革蘭陰性菌耐藥性的獲得與傳遞中的作用，探討整合子一基因盒系統(tǒng)介導(dǎo)和傳播細菌耐藥性的分子機制，為控制細菌耐藥性及多重耐藥性的產(chǎn)生及擴散、指導(dǎo)臨床合理使用抗生素提供理論依據(jù)。 方法 從健康人腸道分離鑒定大腸埃希菌；用K-B法測定150株大腸埃希菌對

2、16種抗生素的敏感性；分析細菌的質(zhì)粒圖譜，并對耐藥菌株進行質(zhì)粒分子分型；用PCR方法檢測細菌總DNA I類整合酶(intll)，再分別對I類整合酶陽性菌株的總DNA和質(zhì)粒DNA采用PCR方法檢測I類整合子；對大小相同的I類整合子作酶切片段長度多態(tài)性分析；對酶切圖譜不同的I類整合子進行測序，分析I類整合子可變區(qū)所含基因盒及基因盒排列；I類整合子的基因定位(質(zhì)粒消除試驗)；質(zhì)粒接合試驗研究I類整合子在大腸埃希菌種內(nèi)的水平傳遞。 結(jié)果

3、 150株試驗菌對6種抗生素的耐藥率超過35.00％，對四環(huán)素、萘啶酸、磺胺甲基異嗯唑、氨芐西林、復(fù)方新諾明和鏈霉素6種抗生素的耐藥率分別為63.33％、49.33％、40.67％、38.67％、35.33％，全部菌株對頭孢美唑、阿米卡星敏感，44株細菌(29.33％)對5種以上抗生素耐藥，69株菌(46％)為多重耐藥菌，5個年齡組多重耐藥率分別為46.67％、40％、46.67％、43.33％、53.33％。多重耐藥大腸埃希菌

4、最多攜帶8個質(zhì)粒。47株菌(32.7％)的總DNA檢測到Ⅰ類整合酶，其中38株菌的總DNA上檢測到Ⅰ類整合子，Ⅰ類整合子陽性菌中有34株菌是多重耐藥菌，33株菌的質(zhì)粒DNA上檢測到Ⅰ類整合子，Ⅰ類整合子大小為150bp～3000bp，共有6種帶型，各菌株只檢出一個整合子。33株總DNA和質(zhì)粒DNA Ⅰ類整合子陽性菌株中，有10株菌經(jīng)質(zhì)粒消除試驗后，質(zhì)粒DNA上未檢測到Ⅰ類整合子，同時檢測總DNA的Ⅰ類整合子，其中有2株菌Ⅰ類整合子仍然存

5、在且大小未改變；另外8株菌Ⅰ類整合子檢測陰性。1500bp大小的Ⅰ類整合子有2種不同的酶切譜型，分別進行DNA 測序后證實序列不同，其余大小相同的Ⅰ類整合子有相同的酶切圖譜，據(jù)此認為它們有相同序列。整合子中最常見的是甲氧芐啶和鏈霉素一壯觀霉素耐藥基因盒，主要的基因盒排列為dfr17-aadA5。耐藥譜或質(zhì)粒分子分型相同的菌株有不同的整合子，耐藥譜或質(zhì)粒分子分型不同的菌株有相同的整合子。接合試驗發(fā)現(xiàn)耐藥基因可在細菌種內(nèi)發(fā)生水平傳遞，且整合