豬場土壤中豬細(xì)小病毒和鏈球菌的檢測與消毒劑的篩選.pdf

1、隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)尤其是集約化養(yǎng)殖的發(fā)展,養(yǎng)殖場周圍的土壤環(huán)境污染問題越來越受到大家的關(guān)注。為此本研究選取豬細(xì)小病毒和豬鏈球菌病原菌為代表,首先建立了檢測土壤中兩種病原菌的方法并利用建立的檢測方法對(duì)豬場土壤中的污染情況進(jìn)行了調(diào)查,然后對(duì)相關(guān)的消毒劑進(jìn)行了篩選,以有效控制豬場土壤環(huán)境中病原菌的污染。
　　 (1)豬場土壤中豬細(xì)小病毒檢測方法的建立及應(yīng)用
　　 選擇豬細(xì)小病毒VP2基因?yàn)榘心繕?biāo),用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)引

2、物設(shè)計(jì)專用軟件,設(shè)計(jì)4條識(shí)別目的片段6個(gè)特異性位點(diǎn)的引物。對(duì)土壤中常見的病原菌進(jìn)行LAMP擴(kuò)增反應(yīng),未發(fā)現(xiàn)非特異性擴(kuò)增反應(yīng),說明其具有較好的特異性。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明其檢測靈敏度為0.002個(gè)TCID50,比PCR高10倍。用該方法對(duì)采自湖北18個(gè)豬場的92份樣品進(jìn)行了檢測,LAMP和PCR分別檢出14份和10份陽性,檢測結(jié)果表明所建立的LAMP是一種特異性高、敏感性強(qiáng)而又快速簡便的檢測方法。
　　 (2)豬場土壤中豬鏈球菌的檢

3、測方法的建立及應(yīng)用
　　 選擇豬鏈球菌GDH基因?yàn)榘心繕?biāo),建立了土壤中豬鏈球菌的PCR檢測方法。利用該方法對(duì)豬場土壤中豬鏈球菌的感染情況進(jìn)行了檢測,結(jié)果在采自18個(gè)豬場的92份樣品中檢出陽性21份,陽性率為22.83％。
　　 同時(shí)對(duì)土壤中豬鏈球菌的培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選。以各抗菌藥物對(duì)豬鏈球菌的MIC90和抗菌譜差異,最終選定多粘菌素B、四環(huán)素、磺胺間甲氧嘧啶作為豬鏈球菌的抗菌添加劑,其濃度分別為30μg/mL、15μg/m

4、L、15μg/mL,生長率為94.1％,可以用于土壤中豬鏈球菌的分離和檢測。
　　 (3)消毒劑對(duì)豬場土壤中豬鏈球菌的殺滅作用
　　 本研究選取依綠笑、戊二醛、安必殺、天然凈四種消毒劑對(duì)土壤中豬鏈球菌進(jìn)行消毒評(píng)價(jià)。稀釋液試驗(yàn)結(jié)果表明:0.1％Tween80/PBS分散性最好。中和劑試驗(yàn)結(jié)果表明:安比殺選用0.5％Na2S2O3+1％卵磷脂+1％ Tween80/PBS；依綠笑選用0.5％Na2S2O3+1％Tween80

5、/PBS；戊二醛選用1％甘氨酸+1％卵磷脂+1％Tween80/PBS。土壤載體試驗(yàn)結(jié)果表明:100mg/L二氧化氯的依綠笑溶液作用1h或0.1％戊二醛溶液作用10min對(duì)豬鏈球菌的殺滅率達(dá)100.0％,安必殺只能在2000mg/L高濃度作用30min下才能殺滅豬鏈球菌,天然凈對(duì)豬鏈球菌基本上沒有殺滅作用。
　　 田間試驗(yàn)結(jié)果表明:選用600mg/L二氧化氯的依綠笑溶液和0.1％戊二醛溶液分別在24h和48h對(duì)土壤中的豬鏈球菌的