大百合無(wú)性系突變體誘導(dǎo)及其鑒定研究.pdf

1、本研究主要以大百合組織培養(yǎng)苗為實(shí)驗(yàn)材料，在前期工作的基礎(chǔ)上，將材料在30W的紫外線30cm處進(jìn)行0h，3h，6h，12h照射以及在0、1.0、2.0、3.0、4.0mmol/L的疊氮化鈉(pH=3)浸泡3h誘變。繼代培養(yǎng)60d后，對(duì)誘導(dǎo)材料進(jìn)行無(wú)性系苗的外觀形態(tài)觀察，生理生化測(cè)定以及RAPD分析以期尋找發(fā)生變異的株系，同時(shí)篩選優(yōu)化處理濃度和建立大百合無(wú)性系突變體鑒定方法，為大百合的引種馴化和后期誘變育種研究作前期準(zhǔn)備。得到如下結(jié)果：

2、 1.繼代培養(yǎng)60d后觀察發(fā)現(xiàn)，在紫外線照射處理3h、6h的大百合組織培養(yǎng)苗的形態(tài)變化不明顯，與對(duì)照相比幾乎沒(méi)有差別，但是12h照射處理發(fā)現(xiàn)大百合組織培養(yǎng)苗開(kāi)始失綠并且變紫，苗體也開(kāi)始大量的死亡。繼代培養(yǎng)60d后在疊氮化鈉處理后觀察發(fā)現(xiàn)，3.0mmol/L處理的大百合有一半小苗逐漸的萎蔫死亡，4.0mmol/L處理的大百合小苗幾乎全部都死亡，因此3.0mmol/L為半致死濃度。 2.未經(jīng)處理的大百合組培苗，葉片呈長(zhǎng)形，葉片較

3、??；紫外線照射后的材料，葉片比較寬大，呈卵圓形，葉片較厚，同時(shí)葉片的顏色較淺，可以看見(jiàn)葉脈分布，苗體矮小，氣孔變大，隨著照射時(shí)間的增加現(xiàn)象更加明顯；經(jīng)過(guò)不同NaN3濃度處理后的大百合組織培養(yǎng)苗的葉片長(zhǎng)度以及氣孔大小沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。 3.隨著紫外線輻照的時(shí)間逐漸變長(zhǎng)，大百合組織培養(yǎng)苗中CAT、POD的活性呈上升趨勢(shì)，增長(zhǎng)變化明顯，與對(duì)照呈顯著關(guān)系。其中SOD活性在輻照6h、12h后含量有所下降；NaN3處理后測(cè)定發(fā)現(xiàn)POD的活

4、性隨著濃度的增加而增加，而SOD的活性隨著濃度的增加反而呈下降趨勢(shì)，CAT的活性變化未呈規(guī)律性交化。 4.本實(shí)驗(yàn)對(duì)大百合進(jìn)行RAPD體系建立與優(yōu)化發(fā)現(xiàn)較為理想的各因子用量和擴(kuò)增程序?yàn)椋篗g2+(2.0mmol/L)1.0μl、dNTPs(0.2mmol/L)1.0μl、primer(0.6μmol/L)1.3μl、DNA(30ng/μl)1.0μl、Taq酶取IU、10×buffer取2μl，總反應(yīng)體系為20μl；擴(kuò)增程序?yàn)椋涸?/p>

5、94℃下預(yù)變性，然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)(94℃變性30s、37℃退火50s、72℃延伸1min)，最后在72℃延伸10min下。電泳電壓為50V，時(shí)間為1h。 5.通過(guò)對(duì)紫外線和疊氮化鈉處理后大百合組織培養(yǎng)苗進(jìn)行RAPD分析，發(fā)現(xiàn)紫外線處理的材料6-23、12-14在RAPD條帶上和其他不同，疊氮化鈉處理的材料D-3-11組織培養(yǎng)苗在RAPD條帶上也出現(xiàn)差異。由此可以推斷這三株材料已發(fā)生了變異。 6.通過(guò)對(duì)大百合外觀形態(tài)觀察