受傷根誘導(dǎo)水稻斑馬葉突變體Oszb功能研究.pdf

1、水稻斑馬葉是一種只在傷根和強(qiáng)光條件下，在水稻新葉片和葉鞘出現(xiàn)黃綠相間的葉色突變性狀，該斑馬葉性狀為一對(duì)隱性核基因遺傳，是水稻兩用核不育系優(yōu)良的標(biāo)記性狀，在雜交稻制種和種子純度鑒定中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究以水稻斑馬葉突變體Oszb與R374雜交后代重組自交系為材料，利用全基因組重測(cè)序的方法克隆斑馬葉基因Oszb;利用克隆到的斑馬葉候選基因構(gòu)建Oszb-RNAi干擾載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物體遺傳轉(zhuǎn)化粳稻日本晴;同時(shí)利用克隆到的斑馬葉候選

2、基因構(gòu)建Oszb互補(bǔ)載體，遺傳轉(zhuǎn)化水稻斑馬葉突變體Oszb，驗(yàn)證所獲斑馬葉突變體Oszb的功能。主要研究結(jié)果如下:
　　1.利用新型分子標(biāo)記SNP和RAD技術(shù)對(duì)水稻斑馬葉突變體基因進(jìn)行定位，找到位于1、2、3、4、11和12號(hào)染色體上的3942個(gè)有分離現(xiàn)象的SNP。通過分析這些SNP位點(diǎn)，確定候選基因在水稻12號(hào)染色體8820367～15181369bp之間。結(jié)合已經(jīng)報(bào)導(dǎo)過的水稻基因功能，初步確定Oszb為目的候選基因。
　

3、　2.將目的候選基因Oszb進(jìn)行RNAi，PCR鑒定發(fā)現(xiàn)在Oszb的RNAi植株中，Oszb的表達(dá)明顯被抑制。將Oszb-RNAi轉(zhuǎn)基因植株在一葉期時(shí)剪去胚根，經(jīng)受傷根誘導(dǎo)和強(qiáng)光照后出現(xiàn)了明顯的白綠相間的斑馬葉性狀。這暗示Oszb可能與水稻斑馬葉的形成有關(guān)。
　　3.互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Oszb互補(bǔ)轉(zhuǎn)基因植株在進(jìn)行潮霉素以及傷根處理后，Oszb互補(bǔ)轉(zhuǎn)基因水稻植株并沒有出現(xiàn)斑馬葉性狀。
　　4.將Oszb-RNAi轉(zhuǎn)基因植株和水