白細胞介素11參與丙型肝炎病毒復制及其逃避宿主細胞固有免疫的分子機制研究.pdf

1、據統(tǒng)計，丙型肝炎病毒感染人數全球約1.7億人，占世界總人口3％。急性HCV感染通常無癥狀，慢性率高達80％，是肝硬化、肝癌等終末期肝病最常見的原因之一。由于經典治療方法聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林治療不良反應多，持續(xù)病毒學應答率低，受患者的健康狀況和HCV基因型限制等原因，現在指南首選直接抗病毒藥(DAAs)索非布韋，達卡他韋以及索非布韋/來地帕韋聯(lián)合治療，治愈率可達95％以上，比經典療法更加有效、安全，耐受性更好，大大降低了肝癌和肝硬化

2、的死亡風險。但HCV的高突變性也使小分子抑制劑的耐藥屏障較低，且尚無有效的疫苗問世。
　　在HCV感染后宿主細胞可通過激活固有免疫抑制病毒復制，而病毒也通過一系列復雜的機制改變宿主細胞免疫因子與宿主細胞維持相對穩(wěn)態(tài)，導致感染的慢性化。前期利用基因芯片對HCV感染后的Huh7細胞進行表達譜分析和蛋白水平檢測顯示，HCV感染可以促進Huh7細胞中TXNIP表達水平顯著上調。而本研究進一步利用RNA干擾技術也確認了TXNIP對HCV復制

3、及細胞自噬具有重要影響。另外，針對Huh7和Huh7.5.1這兩種HCV易感性顯著不同的同源細胞株，以往文獻認為RIG-Ⅰ突變造成的固有免疫功能缺失是HCV在Huh7.5.1細胞內復制增強的主要原因，但其識別機制仍存在爭議，近期有文獻報道MDA5也參與識別HCV，而通過分析兩種細胞株發(fā)現TXNIP差異化表達也是導致Huh7.5.1對HCV易感的重要原因之一。
　　為了探究HCV與固有免疫的相互作用機制，尋找HCV挾持宿主因子逃避細

4、胞固有免疫的更多證據，將HCV感染后的Huh7和Huh7.5.1細胞培養(yǎng)上清處理CD81-Huh7細胞，發(fā)現上清中存在可溶性因子上調TXNIP表達，通過對HCV感染12h，36h，60h后的Huh7細胞進行轉錄組測序分析，篩選出顯著上調的細胞因子IL-11和TNF-α，隨后利用外源性細胞因子處理Huh7細胞，在mRNA水平和蛋白水平檢測發(fā)現IL-11顯著上調Huh7細胞內TXNIP表達，而TNF-α顯著抑制TXNIP表達。利用IL-11

5、抑制劑處理Huh7細胞后也觀察到TXNIP表達水平和HCV RNA均明顯降低。另一方面，通過對比檢測Huh7和Huh7.5.1細胞，發(fā)現Huh7.5.1細胞IL-11表達量顯著高于Huh7細胞。這些結果表明IL-11差異化表達同樣是Huh7.5.1細胞對HCV易感的重要因素之一。另外，通過刺激干擾素通路信號分子RIG-Ⅰ和MDA5，推斷出Huh7.5.1細胞MDA5信號通路存在不足，同時，刺激Huh7細胞MDA5可以上調TXNIP表達，

6、這為HCV感染逃避細胞固有免疫的策略提供了新的思路。
　　鑒于TXNIP在機體正常生理功能和應激條件下均發(fā)揮重要作用，而IL-11作為一種可被HCV感染誘導產生的負性免疫調控因子，與HCV復制及逃避固有免疫作用機制的研究在國內外文獻中尚未見報道，本研究首次揭示了IL-11在HCV感染中誘導TXNIP高表達的重要作用，初步闡述了其作用機制，并對Huh7和Huh7.5.1兩種細胞株差異性支持HCV感染的機制提供了新的線索，也為開發(fā)現抗