低頻超聲聯(lián)合環(huán)內(nèi)沙星對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜的殺菌作用及其結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、第一部分:低頻超聲聯(lián)合環(huán)丙沙星對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜的殺菌作用
　　 [目的]研究低頻超聲聯(lián)合環(huán)丙沙星對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜(biofilm,BF)的膜內(nèi)細(xì)菌的殺菌作用。
　　 [方法]體外建立銅綠假單胞菌PAO1菌株BF模型,用快速銀染法鑒定BF。將BF模型隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組,低頻超聲組,環(huán)丙沙星組,環(huán)丙沙星+低頻超聲組(超聲輻射前給藥),低頻超聲+環(huán)丙沙星組(超聲輻射后給藥),分別處理后用二甲氧唑黃(XTT)比

2、色法測(cè)定BF內(nèi)細(xì)菌活性的情況。
　　 [結(jié)果]快速銀染法顯示聚乙烯表面可見(jiàn)成熟BF。XTT比色法顯示5組在450nm處的吸光值(OD450值),空白對(duì)照組為2.30±0.55,低頻超聲組為2.71±0.80,環(huán)丙沙星組為2.57±0.70,環(huán)丙沙星+低頻超聲組為1.48±0.50,低頻超聲+環(huán)丙沙星組為1.63±0.50,空白對(duì)照組、低頻超聲組、環(huán)丙沙星組的細(xì)菌活性之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05),環(huán)丙沙星+低頻超聲組與低頻超聲

3、+環(huán)丙沙星組與其他三組相比細(xì)菌活性有顯著性差異(P＜0.05),環(huán)丙沙星+低頻超聲組與低頻超聲+環(huán)丙沙星組的細(xì)菌活性沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。
　　 [結(jié)論]低頻超聲及環(huán)丙沙星單獨(dú)作用對(duì)BF無(wú)殺菌作用,低頻超聲聯(lián)合環(huán)丙沙星后,對(duì)BF有很好的殺菌作用。
　　 第二部分:低頻超聲聯(lián)合環(huán)丙沙星對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜結(jié)構(gòu)的影響
　　 [目的]研究低頻超聲聯(lián)合環(huán)丙沙星對(duì)銅綠假單胞菌PAO1菌株生物被膜(biofilm,

4、BF)結(jié)構(gòu)的影響,并初步探討其作用機(jī)制。
　　 [方法]體外建立PAO1菌株BF模型,隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組,低頻超聲組,環(huán)丙沙星組,環(huán)丙沙星+低頻超聲組(超聲輻射前給藥),低頻超聲+環(huán)丙沙星組(超聲輻射后給藥),5組分別處理后,用熒光探針SYTO9/PI標(biāo)記,激光共聚焦顯微鏡(Confocal LaserScanning Microscopy,CLSM)觀察,并結(jié)合圖像結(jié)構(gòu)分析(ImageStructure Analyzer

5、,ISA)軟件對(duì)BF結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量分析;掃描電鏡(Scanning Electron Microscope,SEM)觀察BF結(jié)構(gòu)的改變。
　　 [結(jié)果]空白對(duì)照組、低頻超聲組、環(huán)丙沙星組的BF厚度、區(qū)域孔徑、平均擴(kuò)散距離、結(jié)構(gòu)熵均無(wú)顯著性差異(P＞0.05),環(huán)丙沙星+低頻超聲組和低頻超聲+環(huán)丙沙星組BF厚度變薄,區(qū)域孔徑增大,平均擴(kuò)散距離與結(jié)構(gòu)熵減小,與空白對(duì)照組、低頻超聲組、環(huán)丙沙星組比有顯著性差異(P＜0.05);掃描電鏡顯