N-乙酰半胱氨酸對銅綠假單胞菌生物被膜的抑制及與環(huán)丙沙星的協(xié)同作用.pdf

1、[目的]探討N-乙酰半胱氨酸(NAC)對銅綠假單胞茵的抑菌作用、對銅綠假單胞菌生物被膜的抑制作用和機(jī)理及與環(huán)丙沙星在抑制生物被膜上的協(xié)同作用。
　　 [方法]應(yīng)用微量肉湯稀釋法測定NAC、哌拉西林(PIP)、環(huán)丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)對銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度(MIC)；應(yīng)用棋盤法測定NAC與上述三種抗菌藥物的聯(lián)合抑菌效應(yīng)。應(yīng)用銀染法、掃描電鏡(SEM)和激光共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察NAC、CIP、NAC+CI

2、P對銅綠假單胞菌PA01生物被膜形態(tài)學(xué)的影響，并應(yīng)用COMSTAT軟件對CLSM觀察到的圖片堆進(jìn)行空間結(jié)構(gòu)定量分析。應(yīng)用結(jié)晶紫染色法定量分析NAC、CIP、NAC+CIP對銅綠假單胞菌生物被膜形成的影響及對成熟生物被膜的破壞作用。應(yīng)用MTT法定量檢測NAC、CIP及二者聯(lián)合應(yīng)用對銅綠假單胞菌生物被膜菌的殺菌作用。應(yīng)用色氨酸法定量檢測NAC對銅綠假單胞菌多糖蛋白復(fù)合物合成的影響。
　　 [結(jié)果]83.3％(25/30)的銅綠假單胞

3、菌可被40mg/ml以下的NAC抑制，對PIP、CIP、AMK的敏感率分別為80.0％、83.3％、80.0％.聯(lián)合抑菌試驗顯示：NAC與PIP表現(xiàn)為協(xié)同(33.3％)和無相互作用(66.7％)；NAC與CIP表現(xiàn)為協(xié)同(50.0％)和無相互作用(50.0％)；NAC與AMK表現(xiàn)為拮抗(13.3％)和無相互作用(86.7％)。NAC單用對PA01成熟生物被膜的影響，快速銀染、掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察到的結(jié)果一致：加用NAC(0.5

4、—10mg/ml)后，隨著NAC劑量的增加，細(xì)菌及細(xì)胞外黏液樣物質(zhì)逐漸減少，增加到10mg/ml時細(xì)菌及細(xì)胞外黏液樣物質(zhì)基本被清除。CIP(8MIC)與NAC聯(lián)合應(yīng)用后，與CIP(8MIC)單用相比，對細(xì)菌及細(xì)胞外黏液樣物質(zhì)抑制作用也隨NAC劑量增加而增強，快速銀染、掃描電鏡觀察到NAC增加到5mg/ml時細(xì)菌及細(xì)胞外黏液樣物質(zhì)基本被清除；激光共聚焦顯微鏡觀察到NAC增加到2.5mg/ml即可以看到生物被膜基本清除。COMSTAT軟件分

5、析結(jié)果顯示：隨著NAC濃度增加，單位面積生物量、基質(zhì)覆蓋率、平均厚度、最大厚度、選定圖像生物膜表面積逐漸減少，表面積和生物量比值、粗糙系數(shù)逐漸增加，同樣顯示NAC與CIP存在協(xié)同作用。結(jié)晶紫定量分析顯示小劑量NAC對銅綠假單胞菌生物被膜的生成影響較小，對成熟生物被膜表現(xiàn)為破壞作用，隨NAC劑量增大，破壞作用增強，尤以10mg/mlNAC破壞作用為顯著，可以使生物被膜下降到原來的50％以下；對已生長3天、6天的銅綠假單胞菌生物被膜，8MI

6、C的CIP合用不同濃度NAC后抑制作用較單用進(jìn)一步下降，以NAC5mg/ml組作用明顯，可分別下降至對照的38.9％±7.7％、39.0％±9.3％，為CIP單用的58.1％±4.9％、48.9％±11.4％；但各個菌株之間差異較大。NAC和CIP單用，分別在2.5mg/ml和2MIC時與對照相比對被膜下細(xì)菌的殺菌作用有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，NAC與CIP聯(lián)合作用后NAC和CIP在0.5mg/ml和1/2MIC時即對被膜下細(xì)菌的殺

7、菌作用有統(tǒng)計學(xué)意義；8MIC的CIP和2.5mg/mlNAC聯(lián)合應(yīng)用后，被膜下菌平均下降為對照的0.94％，與單用8MIC的CIP相比被膜下菌下降了96.8％，與單用2.5mg/mlNAC相比，被膜下菌下降了95.4％。對生物被膜多糖蛋白復(fù)合物(GLX)，NAC同樣有抑制作用，0.5mg/ml、1mg/ml的NAC可以使銅綠假單胞菌生物被膜GLX含量分別下降27.64％和44.59％。
　　 [結(jié)論]10mg/ml以上的NAC對