九龍江流域耐藥細菌及其特定耐藥基因和整合子的研究.pdf

1、囊萎夫學碩士學位論文九龍江流域耐藥細菌及其特定耐藥基因和整合子的研究S t u d i e s o n A n t i b i o t i c ．r e s i s t a n tB a c t e r i aI s o l a t e df r o m J i u l o n gR i v e r a n d T h e i r C a r r y i n gR e s i s t a n t G e n e s a n d I n

2、t e g r o n s論文答辯日期： 2 Q 里§生魚旦里三日九龍江流域耐藥細菌及其特定耐藥基因和整合子的研究摘 要自發(fā)現(xiàn)并開始使用抗生素后，細菌耐藥性就已經(jīng)產(chǎn)生并且隨著抗生素的廣泛使用而日益嚴重，嚴重威脅著人類和動物的健康，如今細菌耐藥性問題己成為全球性研究熱點。本研究從九龍江流域選取2 1 個站點采集表面水體樣品，通過抗生素篩選平板篩選出1 9 1 株無重復耐藥細菌。利用1 6 Sr D N A 分子鑒定以及0 T U

3、 聚類分析和系統(tǒng)發(fā)育樹確定1 9 1株耐藥細菌屬于2 0 個菌屬，以不動桿菌屬( 2 5 ．7 ％) 、氣單胞菌屬( 1 6 ．2 ％) 、叢毛單胞菌屬( 1 4 ．7 ％) 和假單胞菌屬( 1 2 ．0 ％) 等菌屬為主。藥敏試驗結果顯示該1 9 1 株耐藥細菌對八大類1 9 種抗生素的耐藥率為8 ．9 ％．9 9 ．5 ％；所有菌株都對3 種或以上抗生素有抗性；總體上看1 9 1 株耐藥細菌對八大類抗生素的耐藥程度為B ．內(nèi)酰胺類&

4、gt; 利福霉素類> 磺胺類> 氯霉素類> 大環(huán)內(nèi)酯類> 四環(huán)素類> 氨基糖苷類> 喹諾酮類。采用P C R 法檢測1 9 1 株耐藥細菌中與上述八大類抗生素耐藥性相關的2 3 種抗性基因的存在情況。結果顯示1 9 1 株耐藥細菌中b l a r E M 基因( 8 9 ．0 ％) 的檢出率最高，其次是a r r 2 ／3基因( 6 6 ．5 ％) ，再者是q n r S 基因( 5 5 ．0 ％)

5、；全部菌株都攜帶至少1 種耐藥基因；總體上看，1 9 1 株耐藥細菌中八大類耐藥基因的陽性率順序為B ．內(nèi)酰胺類> 利福霉素類> 喹諾酮類> 磺胺及甲氧芐啶類> 氨基糖苷類> 四環(huán)素類> 氯霉素類> 大環(huán)內(nèi)酯類，與耐藥表型比較并非完全對應，猜測是由于細菌有更多的耐藥基因和耐藥機制以及某些耐藥基因表達水平低下或表達失敗等原因所導致。此外，1 9 1 株耐藥細菌均檢測出1 型整合酶基因，5 株檢測出

6、2 型整合酶基因，無菌株檢測到3 型整合酶基因。1 9 1 株l 型整合酶基因陽性菌株中有7 0 株成功擴增出可變區(qū)，基因盒排列共有3 1 種，以d f r A l 2 —0 ，肛a a d A 2 最為普遍，還包括9 種新型基因盒排列：a a d A 5 一o r f D 、q a c H - c m l A l 一a a d A 2 、a a c A 4 一a a d A l 一t n a A ’、a a c A 4 一e r e

7、A l 一b Z 蚴一2 一a a d A l 、d f r A 5 一a a c A 4 一n i t l —n i t 2 一c a t B 3 、d f r A l 7 - a a c A 4 一n i t l —n i t 2 一c a t B 3 、u n k n o w n —a a c A 4 一e r e A l 一b l a o x A 一2 一d f r A l 、d U r A l 6 一b l a p s E -

8、 i —a a d A 2 一c m l A l 一a a d A l 、d U r A l 6 一b l a p s E 4 一a a d A 2 ．c m l A l 一o r f A ’一t r i a l s 47 。而3 1 種排列共涉及3 4 種基因盒，包括2 7 種抗性基因、4 種編碼未知功能的假設蛋白基因、2 種類似轉座酶基因和1 種新型基因。其中以a a d A 2 出現(xiàn)的頻率最高，該基因賦予細菌對鏈霉素和奇霉素的耐藥