基于整合子—基因盒系統(tǒng)的胃腸道革蘭陰性細菌耐藥機制研究.pdf

1、目的：了解H.pylori對呋喃唑酮的耐藥率，探討其耐藥機制；考察消化系統(tǒng)分離的臨床常見革蘭陰性細菌整合酶的流行狀況；分析整合子的種類、結(jié)構(gòu)特征和分布，探討其在宿主菌抗生素耐藥及多重耐藥中的作用；通過E.coli整合子的檢測和染色體DNA的脈沖場電泳分析等，尋找消化系統(tǒng)常見細菌耐藥性傳播的途徑與可能機制，增強臨床醫(yī)生抗生素正確、合理的使用意識。 結(jié)果:1.46株H.pylori臨床分離菌中有4株對呋喃唑酮耐藥，耐藥率為8.7％，

2、以低水平耐藥為主，未見有高水平耐藥。PCR擴增porD和oorD基因，產(chǎn)物大小為592bp和458bp。基因測序后發(fā)現(xiàn)，呋喃唑酮耐藥H.pylori臨床分離株中，porD基因有三個位點的突變，分別是C357T、A356G、G353A，但以C357T最為常見，而中度敏感的菌株中也發(fā)現(xiàn)了基因的突變C357G；oorD基因也有三個位點的突變，分別是A041G、A122G、C349A(G)，在349位既有C→A又有C→G突變，但是都導(dǎo)致了天冬酰

3、胺被賴氨酸代替。H.pylori對呋喃唑酮耐藥性的誘導(dǎo)未獲成功。 2.臨床分離的胃腸道革蘭陰性細菌三類整合酶的陽性率差異較大，Ⅰ類整合酶的陽性率為43.2％、Ⅱ類和Ⅲ類整合酶的陽性率分別為49％和2％，以E.coli Ⅰ類整合酶的陽性率為最高，達61％。3.PCR擴增整合酶陽性的臨床分離株Ⅰ類整合子，測序后發(fā)現(xiàn)共有5種不同基因盒，分別為：dfrA17、aadA5、aad4Al、aadA2、dhrfXI。有4種不同的整合子基因

4、盒排列方式大小在1500～2000bp左右，E.coli中共檢測到89株細菌含有Ⅰ類整合子，絕大多數(shù)整合子的排列方式為：dfrA17-aadAS,僅有一株細菌排列方式為aadAl；而肺炎克雷伯菌中僅有1株含有基因盒，其排列方式為aadA，鮑曼不動桿菌共檢測到4株含有整合子，其基因盒排列方式為：dhrfXI-aadA2；陰溝腸桿菌中檢測到一株含有整合子，其基因盒排列方式與E.coli基因盒的排列方式相同。 4.89株整合子陽性的E.col

5、i中21株產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶。 5.在整合子陽性的E.coli中，有10株在Ⅰ類整合子第一個3’保守區(qū)域后檢測到orf513、orf 3-like、 IS3000和orf5基因，但在這10株中，僅有5株在orf513基因的下游檢測到blaCTX-M-1基因，首次報道了分離于人E.coli菌株中檢測到ISCR1相關(guān)的含有blaCTX-M-1基因復(fù)雜Ⅰ類整合子。PFGE分析blaCTX-M-1基因相關(guān)的含有復(fù)雜Ⅰ類整合子的E.col

6、i發(fā)現(xiàn)，zj102和zj562兩株源于同一克隆。 結(jié)論: 1.鎮(zhèn)江地區(qū)H Pylori臨床分離株對呋喃唑酮的耐藥率較低，而且以低水平的耐藥為主，H Pylori菌對呋喃唑酮的耐藥可能與porD和oorD基因的突變有關(guān)。 2.鎮(zhèn)江地區(qū)流行的整合子以Ⅰ類整合子為主，其中E.coli整合子檢出率為高。分析其可變區(qū)基因盒結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，這些耐藥基因盒主要編碼甲氧芐啶耐藥和鏈霉素、壯觀霉素耐藥的兩大基因家族。 3.鎮(zhèn)江地