酶酚酸酯單藥或聯(lián)合益腎湯干預(yù)IgA腎病小鼠研究.pdf

1、研究目的: 探討酶酚酸酯單藥或者聯(lián)合中藥復(fù)方益腎湯對(duì)IgA腎病小鼠的治療作用及其可能的作用機(jī)理。 材料和方法: 雌性健康BALB/C小鼠70只隨機(jī)分成正常對(duì)照組和造模組，其中正常對(duì)照組16只，造模組54只，造模組按文獻(xiàn)方法采用牛血清白蛋白聯(lián)合葡萄球菌腸毒素B制作小鼠IgA腎病模型。第8周末時(shí)分別在正常對(duì)照組和造模組中選取4只處死并初步驗(yàn)證模型成功后，剩余造模組小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、益腎湯組、酶酚酸酯組、酶酚酸酯

2、聯(lián)合益腎湯并分別給予等量生理鹽水、中藥益腎湯煎劑、酶酚酸酯溶液、酶酚酸酯和益腎湯復(fù)合液。定期收集小鼠尿標(biāo)本檢測(cè)尿紅細(xì)胞、尿蛋白。第12周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠，收集小鼠血標(biāo)本檢測(cè)腎功能，取腎組織液氮保存，分別作普通光鏡HE、PAS、MASSON、PASM染色及免疫熒光、免疫組化、熒光定量PCR檢查，普通光鏡下觀察病理情況，免疫熒光觀察腎小球系膜區(qū)IgA 沉積情況，免疫組化SABC法觀察腎臟系膜區(qū)MMP-9和TIMP-1、TGF-β1的表達(dá)

3、，F(xiàn)Q-RT-PCR法分別檢測(cè)各組小鼠腎組織MMP-9、TIMP-1mRNA、TGF-β1mRNA表達(dá)。采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果: 1、IgA腎病模型的驗(yàn)證：實(shí)驗(yàn)第8周末，隨機(jī)抽取的造模組小鼠尿蛋白、尿紅細(xì)胞均明顯高于正常對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(各指標(biāo)均P<0.05)；光鏡示造模組小鼠輕中度系膜增生性變?yōu)橹?，而正常組腎病理未見(jiàn)明顯異常；免疫熒光示：造模組各小鼠大部

4、分腎小球系膜區(qū)IgA團(tuán)塊狀沉積，而正常對(duì)照組未見(jiàn)上述改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)模型對(duì)照組再次檢測(cè)以上指標(biāo)，提示各觀察指標(biāo)進(jìn)一步惡化，并且BUN、CR升高，而正常對(duì)照組仍未見(jiàn)上述改變(P<0.05)．模型對(duì)照組也發(fā)現(xiàn)MMP-9表達(dá)輕度升高，TIMP-1、TGF-β1明顯升高。 2、酶酚酸酯組：與IgA腎病小鼠模型對(duì)照組相比，尿蛋白明顯減少(P<0.05)，血清BUN、CR明顯下降(P<0.05)，免疫熒光提示腎小球系膜區(qū)IgA沉積相對(duì)明顯減

5、少(P<0.05)，光鏡示腎組織病理?yè)p害(主要是系膜細(xì)胞增生)程度相對(duì)較輕(P<0.05)，免疫組化提示腎小球及間質(zhì)MMP-9表達(dá)上調(diào)，TIMP-1、TGF-β1表達(dá)下調(diào)(均P<0.05)，F(xiàn)Q-RT-PCR提示腎組織MMP-9mRNA表達(dá)上調(diào)，而TIMP-1mRNA、TGF-β1mRNA表達(dá)下調(diào)(均：P<0.05)，但血尿嚴(yán)重程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 3、酶酚酸酯、益腎湯單用組對(duì)比：?jiǎn)斡妹阜铀狨ソM與單用益腎湯組二者在

6、減少尿蛋白、血BUN、CR方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但益腎湯組在減少血尿方面卻比酶酚酸酯組更有優(yōu)勢(shì)(P<0.05)；在減少系膜區(qū)IgA免疫熒光沉積方面酶酚酸酯組卻優(yōu)于益腎湯組(P<0.05)；在分子生物學(xué)指標(biāo)方面，二者雖然都可以下調(diào)TGF-β1、TIMP-1的mRNA及蛋白表達(dá)，上調(diào)MMP-9的mRNA及蛋白表達(dá)(P<0.05)，但酶酚酸酯組TIMP-1的mRNA及蛋白下調(diào)更明顯(P>0.05)，而益腎湯組則上調(diào)MMP-9的m

7、RNA及蛋白表達(dá)更明顯(P>0.05)，在下調(diào)TGF-β1mRNA及蛋白表達(dá)方面二者則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4、酶酚酸酯、益腎湯聯(lián)用情況：酶酚酸酯聯(lián)合益腎湯治療組在減少蛋白尿、血尿、BUN、CR、腎病理?yè)p害方面比酶酚酸酯或益腎湯效果更好；在免疫熒光強(qiáng)度指標(biāo)上，聯(lián)合治療組略有降低，但與酶酚酸酯組無(wú)明顯差異(P>0.05)；在分子生物學(xué)指標(biāo)方面，聯(lián)合治療組比兩單藥使用，具有更明顯的下調(diào)TGF-β1的作用，在上調(diào)MMP-9的

8、表達(dá)方面比酶酚酸酯組更有優(yōu)勢(shì)，在下調(diào)TIMP-1表達(dá)上比益腎湯組更明顯(P>0.05)。 結(jié)論： 1.本研究成功建立了IgA腎病小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 2.酶酚酸酯能夠改善IgAN小鼠蛋白尿、腎功能、延緩腎病理?yè)p害的進(jìn)展，但不能改善血尿，其作用機(jī)理可能與其抑制系膜細(xì)胞增生、減少腎小球系膜區(qū)IgA免疫復(fù)合物的沉積、上調(diào)腎組織MMP-9mKNA表達(dá)、下調(diào)TIMP-1mRNA、TGF-β1mRNA表達(dá)有關(guān)。 3.酶