TRB3與ATF5之間的相互作用在2型糖尿病治療中的研究.pdf

1、糖尿病已成為繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后的第三大嚴(yán)重危害人類健康的慢性疾病。胰島素抵抗是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，而肥胖又會加重胰島素抵抗。所以了解體內(nèi)脂肪細(xì)胞的產(chǎn)生過程，明確脂肪細(xì)胞分化中的分子機(jī)理，為糖尿病的治療提供新的思路。
　　 TRB3是哺乳動物中與果蠅tribbles基因同源的基因，目前對TRB3的研究主要集中在胰島素信號通路、NF-KB信號通路、BMP信號通路和脂代謝等方面，發(fā)現(xiàn)TRB3抑制前脂肪細(xì)胞的分化。ATF5，

2、人轉(zhuǎn)錄激活因子5，屬于轉(zhuǎn)錄因子ATF/CREB（cAMP效應(yīng)元件結(jié)合蛋白）家族的成員，具有堿氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域與DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，目前研究發(fā)現(xiàn)ATF5在多種組織和細(xì)胞的分化，增殖，生存過程中發(fā)揮著重要作用。本實驗探討TRB3與ATF5之間的相互作用對于前脂肪細(xì)胞分化的影響，為糖尿病的治療提供新的靶點。
　　 實驗方法:(1)分子克隆真核表達(dá)質(zhì)粒HA-TRB3、GFP-ATF5以及構(gòu)建GFP-ATF5-△β-Zip、GFP-ATF5-

3、β-Zip質(zhì)粒(2)通過confocol、Luciferase、co-IP實驗驗證ATF5和TRB3的相互作用;(3)獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)TRB3的細(xì)胞系，包裝腺病毒ATF5，分析ATF5和TRB3之間的相互作用對于前脂肪細(xì)胞分化的影響。(4)分別以高糖刺激下的2型糖尿病老鼠為模型，分析ATF5和TRB3的相互作用對老鼠血糖等生理指標(biāo)的影響。
　　 實驗結(jié)果:(1)成功構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒HA-TRB3、GFP-ATF5以及GFP-ATF5-△

4、β-Zip、GFP-ATF5-β-Zip質(zhì)粒。(2)通過confocol、Luciferase、co-IP實驗驗證ATF5和TRB3的相互作用，并且通過co-IP實驗進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)TRB3與ATF5的β-Zip結(jié)構(gòu)域相互作用。(3)成功獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)TRB3的細(xì)胞系和包裝成功腺病毒ATF5。(4)TRB3與ATF5的相互作用抑制前脂肪細(xì)胞的分化。
　　 實驗結(jié)論:首次證實了TRB3與ATF5的相互作用，并且進(jìn)一步分析得知TRB3與ATF5