酶催化交聯(lián)的透明質(zhì)酸水凝膠的合成及其藥物控釋應(yīng)用.pdf

1、近年來，酶催化交聯(lián)制備水凝膠受到人們廣泛關(guān)注。酶作為生物催化劑催化交聯(lián)制備水凝膠具有以下優(yōu)勢：反應(yīng)條件溫和、酶具有獨特的化學(xué)選擇性、可避免有毒交聯(lián)劑的使用。辣根過氧化酶（HRP）經(jīng)雙氧水（H2O2）活化后能夠高效催化苯酚和苯胺類衍生物自由基耦合，以HRP為酶介導(dǎo)的催化體系已成功應(yīng)用于高效制備水凝膠，然而直接添加H2O2可能會導(dǎo)致HRP催化活性降低或影響封裝藥物的生理活性。本論文以巰基接枝改性的透明質(zhì)酸（HA-SH）為原料，利用HRP為酶

2、介導(dǎo)的催化體系，以酪胺作為酶催化底物，在無需添加H2O2的條件下，酶催化交聯(lián)巰基，分別制備了具有還原響應(yīng)性的二硫鍵交聯(lián)的HA水凝膠和微凝膠，并將微凝膠包埋在HA水凝膠內(nèi)部制備了復(fù)合凝膠，并系統(tǒng)研究了HA水凝膠、微凝膠和復(fù)合凝膠的藥物控釋性能。
　　本論文第一部分分別用 HRP/酪胺酶催化體系和 HRP/H2O2酶催化體系制備了HA-SH和HA-Tyr水凝膠，并研究了這兩種催化體系的酶催化效率。實驗結(jié)果表明可以通過單獨改變HRP和酪

3、胺的濃度來調(diào)控凝膠化速率，并且在20 min左右能夠快速凝膠化，體系在不外加H2O2的條件下，幾乎和HRP/H2O2催化體系的催化效率相當(dāng)。水凝膠降解實驗結(jié)果表明，這種二硫鍵交聯(lián)的水凝膠在還原性介質(zhì)下能夠快速降解，并能通過改變還原性介質(zhì)濃度（L-半胱氨酸）來控制降解速率。水凝膠溶脹實驗結(jié)果表明，隨著HA-SH濃度的增大，水凝膠的平衡溶脹率越小，并且溶脹性能不隨HRP和酪胺濃度的改變而發(fā)生變化。流變學(xué)分析表明，HA-SH水凝膠具有很好的穩(wěn)

4、定性以及具有完善的彈性網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，隨著HA-SH濃度從1％增加至3%，水凝膠的儲能模量（G′）從64 Pa增大至220 Pa。以熒光標記的葡聚糖（FITC-Dextran）為模型藥物進行藥物釋放實驗，結(jié)果表明：HA-SH濃度和藥物分子量的增大都能夠有效減弱藥物釋放的突釋效應(yīng)，并延長藥物釋放時間。綜上所述，這種凝膠化可控以及降解可控的水凝膠是一種很有應(yīng)用前景的藥物緩釋材料。
　　本論文第二部分通過反相乳液法以 HRP/酪胺催化體系催化

5、 HA-SH交聯(lián)制備了HA-SH微凝膠，并將HA-SH微凝膠分別包埋在HA-SH、HA-Tyr宏觀水凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中，制備了雙重載藥復(fù)合凝膠。并通過粒度分析（LSPSA）以及掃描電鏡（SEM）可以看出此反相乳液酶催化法制備的微凝膠大小分布均勻，尺寸約為10μm，并均勻分散在宏觀水凝膠的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中。流變學(xué)分析表明，復(fù)合凝膠具有更高的儲能模量，當(dāng)HA-SH和HA-Tyr水凝膠內(nèi)部填充0.2%（g/mL）的微凝膠后，儲能模量分別從63 Pa、3