對羥基苯甲醛等天麻成分對灰樹花多糖代謝的影響及其機(jī)理研究.pdf

1、本文主要是基于天麻中主要成分影響灰樹花多糖代謝的機(jī)理研究。首先，在灰樹花發(fā)酵體系中添加天麻提取物，探索和分析中藥天麻的添加對灰樹花生物量和胞外多糖產(chǎn)量的影響。其次，采用高效液相色譜法（HPLC）測定天麻醇提取物中天麻素、對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛含量，并在灰樹花發(fā)酵過程中添加不同濃度梯度的天麻素、對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛純品，探明這三種成分中對灰樹花胞外多糖增效貢獻(xiàn)力最大的成分。最后，動態(tài)測定發(fā)酵期間灰樹花生物量、胞外多糖及其關(guān)鍵酶酶

2、活力變化，從酶活角度論述天麻中主要成分促進(jìn)灰樹花胞外多糖生物合成機(jī)理。主要研究結(jié)論如下：
　　在灰樹花發(fā)酵體系中分別添加不同濃度梯度的75％天麻醇提取物，分析天麻醇提取物添加濃度對灰樹花菌體生長和胞外多糖產(chǎn)量的影響結(jié)果表明：75%天麻醇提取物添加量在3-9g/L是均能顯著促進(jìn)灰樹花菌體生長和提高胞外多糖產(chǎn)量（P＜0.05），其中添加量為7 g/L時效果最佳，生物量和胞外多糖分別達(dá)最大值1.366和2.196 g/L，與空白組比較，

3、分別增加了78.54%和142.83%。
　　采用不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液分別對天麻粉進(jìn)行常溫靜置浸提和超聲浸提后，用HPLC法測定天麻醇提取物中天麻素、對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛含量。常溫浸提48h條件下，75%乙醇天麻醇提取物滅菌后的所測三種成分的提取效果最佳，其天麻素、對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛的含量分別為：5.4660、0.8317、1.5913（mg/g）。
　　根據(jù)常溫浸提48h條件下，滅菌后7g75%天麻醇提取物中

4、天麻素、對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛的含量，在灰樹花深層發(fā)酵體系中分別添加不同濃度的這三種成分，結(jié)果表明：適宜質(zhì)量濃度的天麻素、對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛均能促進(jìn)灰樹花菌體的生長和胞外多糖的生物合成，其中對羥基苯甲醛添加量為0.15 g/L時對灰樹花胞外多糖合成的促進(jìn)作用效果最佳，其胞外多糖達(dá)最大值2.251 g/L，與空白組比較增加了40.53%。因此，對羥基苯甲醛是促進(jìn)灰樹花菌體的生長和胞外多糖的生物合成增效貢獻(xiàn)力最大的天麻成分。

5、r>　　比較分析0.15 g/L對羥基苯甲醛和7 g/L天麻醇提取物對灰樹花胞外多糖促進(jìn)作用的結(jié)果表明，對羥基苯甲醛略低于天麻醇提取物。并且在整個發(fā)酵過程中對羥基苯甲醛的生物量和胞外多糖均略低于天麻醇提取物。
　　動態(tài)測定灰樹花發(fā)酵過程中菌體生物量、胞外多糖產(chǎn)量、pH值、還原糖含量和對羥基苯甲醛含量變化發(fā)現(xiàn)，灰樹花可充分利用營養(yǎng)物質(zhì)（葡萄糖等）和天麻活性成分（對羥基苯甲醛）來促進(jìn)自身生長和胞外多糖產(chǎn)量生物合成。在發(fā)酵培養(yǎng)的1-5d

6、，菌體生長處于調(diào)整期，灰樹花率先利用葡萄糖等營養(yǎng)物質(zhì)和天麻活性成分（對羥基苯甲醛）來促進(jìn)自身生長；在發(fā)酵的5-9d，菌體生長處于對數(shù)期，灰樹花快速增長的同時通過多糖合成途徑大量產(chǎn)胞外多糖；在發(fā)酵的9-13d，菌體生長處于穩(wěn)定期，灰樹花菌體生長達(dá)到飽和狀態(tài)，基本不再產(chǎn)胞外多糖。
　　在灰樹花發(fā)酵體系中添加0.15 g/L對羥基苯甲醛和7 g/L天麻醇提取物，所測五種胞外多糖合關(guān)鍵酶均表現(xiàn)出高度酶活性，并且在發(fā)酵的第7d酶活力最大。除

7、dTDP-鼠李糖合成酶系活力是對羥基苯甲醛實驗組高于天麻醇提取物實驗組外，其余酶活力（包括α-磷酸葡萄糖變位酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶、UDP-葡萄糖脫氫酶、dTDP-葡萄糖焦磷酸化酶）均是天麻醇提取物實驗組最高。對羥基苯甲醛和天麻醇提取物主要是通過提高這五種關(guān)鍵酶活力來促進(jìn)灰樹花菌體生長和胞外多糖生物合成。本研究從酶活角度論述天麻中主要成分促進(jìn)灰樹花胞外多糖生物合成機(jī)理，選出胞外多糖合成關(guān)鍵酶，可為后期從基因水平研究此作用機(jī)理奠定基