他克莫司口服大分子復合物膠束制劑的研究.pdf

1、他克莫司（英語:Tacrolimus，簡稱FK506或Tac，商品名:Prograf，普樂可復）作為免疫抑制藥在機體內(nèi)的作用機制為抑制白細胞介素-2合成，阻斷鈣調(diào)磷酸酶對T細胞的啟動作用，同時還抑制白細胞介素-2受體的表達，中斷受體介導的信號傳導過程而發(fā)揮作用。日本藤澤制藥1984年首次發(fā)現(xiàn)了他克莫司，經(jīng)研究已掌握了其全合成工藝。FK506與環(huán)胞霉素A(CsA)是作用機理相似的第二代免疫抑制劑，多項臨床研究表明FK506有更好的免疫抑制

2、效力。FK506較大的相對分子質(zhì)量和疏水性大環(huán)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)導致其口服后胃腸道吸收有限。本研究制備了載FK506的F127-CS/DCA膠束，并對其各項理化性質(zhì)和體內(nèi)藥物吸收機制及藥代動力學特征進行了相關(guān)評價，說明了F127-CS/DCA膠束為載體對FK506口服給藥吸收能力的改善。本研究分為以下五個部分:
　　1.普朗尼克F127-殼聚糖結(jié)合物制備及表征
　　本部分選擇普朗尼克F127(F127)作為骨架，通過殼聚糖(CS)分子

3、中的氨基的化學反應將其連接到單羧基化的普朗尼克F127骨架上，并利用紅外光譜(IR)和1H核磁共振波譜(1H-NMR)對聚合物的結(jié)構(gòu)進行驗證和表征。表征說明，在F127-CS的1H-NMR圖譜中顯示同時存在CS的特征峰(5.0ppm和3.1ppm附近)和F127的吸收峰(3.6ppm和1.1ppm附近)，因此可以說明成功合成了F127-CS結(jié)合物。F127-CS的IR圖譜中顯示，接上CS以后，羰基伸縮振動特征峰在1735.97 cm-1

4、出現(xiàn)，從而證明CS成功被連接到F127骨架上，可以說明得到的產(chǎn)物即F127-CS聚合物。
　　2.處方前研究與膠束的制備
　　本部分對FK506的基本理化性質(zhì)及空白脫氧膽酸鈉(DCA)和空白F127-CS/DCA膠束的臨界膠束濃度(CMC)進行了處方前測定，熒光探針法測定CMC的結(jié)果表明，空白F127-CS/DCA膠束和空白DCA膠束的臨界膠束濃度分別在2.65×10-3 mol/L和1.8×10-2mol/L左右?？瞻譌1

5、27-CS/DCA膠束的CMC顯著降低，說明使用合成的F127-CS后，所制備膠束的穩(wěn)定性得到了提升，具備更加優(yōu)良的抗體液稀釋能力。本部分建立了FK506的體外含量測定方法。選擇薄膜超聲法制備他克莫司F127-CS/DCA大分子復合物膠束，研究其載FK506的能力并以粒徑，載藥量(DL)，Zeta電位等為指標篩選對膠束結(jié)構(gòu)及性質(zhì)影響較大的單因素，在此基礎(chǔ)上，以DL為優(yōu)化指標，通過均勻設(shè)計篩選確定最優(yōu)處方，綜合考慮包封率(EE)，粒徑及Z

6、eta電位對F127-CS/DCA FK506大分子復合物膠束的影響，確定膠束制備的最優(yōu)處方為F127-CS與DCA投料比(m/m)X1=1∶1,FK506的投藥量X2=8 mg，水化溫度X3=20℃，水相體積X4=8 mL，水化時間X5=8 min。
　　3.載藥膠束理化性質(zhì)考察及體外釋放實驗
　　本部分通過對FK506 F127-CS/DCA大分子復合物膠束的外觀及理化性質(zhì)等的考察對其最優(yōu)制備處方進行了驗證。結(jié)果表明，F(xiàn)

7、K506 F127-CS/DCA大分子復合物膠束溶液顯現(xiàn)為澄清透明狀態(tài)，透射電鏡(TEM)下膠束呈較均勻的類球形，貝克曼粒徑和電位儀測定平均粒徑為(55.77±2.23) nm，平均電位為(-6.38±0.47) mV。膠束的體外釋放實驗采用透析袋法考察了制劑在人工胃液(含1％吐溫-80)以及人工腸液(含1％吐溫-80)中的釋藥速度和程度。通過對釋放結(jié)果的模型擬合， FK506注射液在兩種介質(zhì)中都呈現(xiàn)出相對較慢的類零級釋放，而載FK50

8、6的DCA膠束和F127-CS/DCA膠束在人工胃液和人工腸液中的藥物釋放均符合一級動力學方程，呈顯著地先快后慢特征。
　　4.大鼠在體腸循環(huán)實驗
　　本部分構(gòu)建了大鼠的在體腸灌流模型，考察了載藥膠束在大鼠小腸中吸收動力學特征及其吸收機制和最佳吸收腸段。大鼠全腸段的吸收實驗結(jié)果表明，26、52、104μ g/mL三個濃度下FK506 F127-CS/DCA大分子復合物膠束灌流液在大鼠小腸內(nèi)的吸收均呈現(xiàn)出一級動力學特征，三種濃

9、度的大分子復合物膠束的Ka分別為0.2355,0.2326和0.221,各組K11無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），可認為被動擴散是FK506 F127-CS/DCA大分子復合物膠束在大鼠小腸內(nèi)的吸收機制，且26-104μg/mL的范圍內(nèi)低中高三種濃度的膠束溶液在大鼠小腸的吸收無顯著性差異。不同腸段的吸收實驗分別測定了FK506 F127-CS/DCA大分子復合物膠束灌流液在大鼠各腸段內(nèi)的吸收情況。結(jié)果顯示，在十二指腸(Duodenum，D

10、uo)，空腸(Jejunum，Jej)，回腸(Ileum，Ile)和結(jié)腸(Colon，Col)的吸收百分率分別為(32.51±2.31)％，(29.89±2.09)％，(31.45±0.71)％和(13.61±1.70)％，十二指腸，空腸和回腸表現(xiàn)出更強的FK506吸收能力。
　　5.FK506口服大分子復合物膠束在大鼠體內(nèi)藥物動力學實驗
　　本部分建立了大鼠血清中FK506的分析方法，利用大鼠他克莫司Elisa試劑盒法測定

11、載藥膠束在大鼠體內(nèi)的藥物動力學數(shù)據(jù)，并對相應的藥動學統(tǒng)計矩參數(shù)進行了計算分析。結(jié)果表明，與FK506膠囊組相比，F(xiàn)K506 F127-CS/DCA大分子復合物膠束組的達峰時間(tmax)由3h提前至1h，口服給藥后吸收速度明顯加快，半衰期(t1/2)由16.09 h延長至18.00 h，平均滯留時間(MRT)由24.68 h延長至27.00 h，說明藥物在體內(nèi)消除的速度減慢，作用時間延長。藥-時曲線下面積(AUC)由533.79 ng/