苯并三嗪衍生物SR-H22質量控制研究.pdf

1、藥品質量控制研究對于新藥研發(fā)極為重要。質量控制不僅需針對原料藥及制劑，還需對輔料、內外包裝材料、生產、儲存和運輸等流通環(huán)節(jié)；對于藥品的安全可控起著決定性的意義。
　　苯并三嗪-1,4-二氧化物衍生物SR-H22為本課題組研制合成的生物還原劑衍生物，本研究對抗腫瘤活性化合物SR-H22的質量控制進行了研究。
　　一 SR-H22的制備及其各中間體熔點、紫外及液相保留時間的測定
　　參照本課題組已有路線制備SR-H22，并

2、對各中間體的熔點、紫外、含量進行測定。
　　二 SR-H22質量控制研究
　　（一）SR-H22含量測定方法的建立
　　建立了化合物SR-H22含量測定的高效液相色譜法，其色譜條件為：色譜柱：Diamond C18 Column(250mm×4.6mm,5um)；流動相：乙腈-水（25:75,V/V）；檢測波長：243nm；流速：1.0ml·min-1；進樣濃度：25ug·ml-1；進樣體積：20ul；柱溫：35℃。液

3、相方法建立后，對其靈敏度、精密度、重現性、線性范圍等進行了考察，表明該液相方法穩(wěn)定可靠，可用于SR-H22的含量測定。
　　在該色譜條件下，理論塔板數按SR-H22峰計算不低于7000，分離度不小于1.5。經過方法學考察，本品在5ug·ml-1-100ug·ml-1(r=0.9979)，峰面積與濃度呈現良好的線性關系，線性方程：Y=1.8105×105X-3.2081×105，檢測限和定量限分別為1ng及3ng，日內精密度、日間精

4、密度RSD考察均小于2％。
　　（二）SR-H22有關物質檢查方法的建立
　　建立了SR-H22的有關物質的檢查方法，其色譜條件為：色譜柱：Diamond C18(250mm×4.6mm,5um)；流動相：乙腈-水（25:75,V/V）；檢測波長243nm；流速：1.0ml·min-1；進樣濃度：100ug·ml-1；進樣體積20ul；柱溫：35℃。
　　考察了酸、堿、氧化、高溫、強光對SR-H22原料藥的影響。試驗結

5、果表明：SR-H22在1mol·L-1HCl、30%H2O2、強光照射、105℃烘箱中放置12h，均未發(fā)現明顯降解產物；表明SR-H22在強酸、氧化、強光及高溫條件下是穩(wěn)定的。但在1mol·L-1NaOH堿性環(huán)境中，常溫放置1h及可發(fā)現明顯降解產物產生，主峰純度下降為80%；若進一步加熱，則會發(fā)現主峰完全消失，轉變?yōu)榻到猱a物。用上述色譜方法能夠使主峰及降解產物完全分離。
　　應用HPLC-MS/MS對降解產物進行分析，具體內容如下

6、：色譜條件同前，檢測m/z為163有關物質2樣品溶液，采用SIM模式分析分析，當Fragmentor為110V時，m/z為163的正離子峰響應最佳。同理，對m/z為147有關物質1采取相同的實驗方式考察，發(fā)現當Fragmentor為90V時，m/z為147的正離子峰響應最佳。
　　考察碰撞能量：當檢測離子m/z為163時，Fragmentor為110V，Collision Energy設置為14V、22V、30V、42V；在不同碰

7、撞能量下，m/z為39、44、65、80、91、133、163的碎片峰均有出現，推測子離子結構。當檢測離子m/z為147時，Fragmentor為90V，Collision Energy設置為18V、22V、26V、46V；在不同碰撞能量下，m/z為39、65、91、147的碎片峰均有出現，推測子離子結構。并確定有關物質2為合成中間體SR-H02。
　?。ㄈ㏒R-H22殘留溶劑的測定
　　為了確保藥品的安全，需對殘留溶劑進

8、行測定。用氣相色譜法建立了SR-H22中4種殘留溶劑的測定方法，具體方法如下：色譜柱：DB-WAX(30m×0.45mm，0.85um)毛細管色譜柱；載氣：高純氮氣；檢測器：FID檢測器。采用程序升溫，柱溫：起始溫度35℃至200℃，保持6min，柱頭壓：4psi。進樣口溫度：220℃，檢測器溫度：250℃。頂空瓶溫度：75℃；定量環(huán)：90℃；傳送帶：100℃。分流進樣，DMSO為溶劑，測定殘留溶劑的含量。方法建立后：對其靈敏度、精密度

9、、重現性及線性范圍等進行考察，表明本法可用于SR-H22的殘留溶劑的測定。保持7min35℃/min速率
　?。ㄋ模┓€(wěn)定性試驗
　　影響因素試驗
　　SR-H22樣品在高溫(60℃)、高濕(92%+5%)和強光照射(4500lx+500lx)條件下開口放置10天，于第5、10天取樣檢驗，了解SR-H22降解產物。試驗結果表明SR-H22原料藥在高溫、高濕和強光照射試驗條件下放置10天穩(wěn)定；外觀、性狀、含量及有關物質均未

10、見明顯變化。
　?。ㄎ澹ζ鹗荚蟂R-H01、合成中間體SR-H02建立了高效液相色譜分析方法SR-H01的液相分析方法為：色譜柱 Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5um)流動相：乙腈-水（45:55,V/V），檢測波長225nm，流速：1.0ml·min-1，柱溫35℃，進樣體積：20ul。在該液相方法上進行了方法學考察，SR-H01的檢測限（LOD）為2ng，定量限（LQD）為6ng；在10u

11、g·ml-1-150ug·ml-1范圍內線性關系良好，方法精密度、日內日間精密度均小于2%。
　　SR-H02液相分析方法同 SR-H22：色譜柱Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5um)流動相：乙腈-水（25:75,V/V），檢測波長238nm，流速：1.0ml·min-1，柱溫35℃，進樣體積：20ul。在該液相方法上進行了方法學考察，SR-H02的檢測限（LOD）為1ng，定量限（LQD）為3n

12、g；在5ug·ml-1-100ug·ml-1范圍內線性關系良好，方法精密度、日內日間精密度均小于2%。
　?。├砘再|及檢查
　　采用薄層色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法對樣品及對照品進行了鑒別測定。根據《中國藥典》2015版第四部通則要求，對三批樣品(批號：20151106、20151109、20151113)進行了理化性質(性狀、溶解度、pH、熔點等)、無機檢查。本品為黃色粉末，無嗅。在甲醇、乙腈、乙醇、N,N

13、-二甲基甲酰胺中微溶，在水、0.1mol·L-1鹽酸，0.1mol·L-1氫氧化鈉中極微溶解，熔點為212.3℃-213.5℃，無引濕性。無機檢查結果顯示：氯化物＜0.01%、硫酸鹽＜0.04%、干燥失重<20ppm、砷鹽<2ppm、熾灼殘渣<0.2%。
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　　參照《中國藥典》2015版、《化學藥物質量標準建立的規(guī)范化過程技術指導原則》的內容，建立SR-H22的原料藥質量標準研究辦法；驗證其專屬性，并對其堿破壞