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文檔簡介
1、抗非生物脅迫是蘋果砧木育種的重要目標,SBP轉(zhuǎn)錄因子與植物非生物脅迫有關(guān)系。為探討 SBP轉(zhuǎn)錄因子在蘋果砧木非生物脅迫中的功能,本研究以不同抗性蘋果砧木‘青砧1號’((平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)×柱型蘋果株系CO(Malus domestica Borkh.)和‘M26’為試材,采用同源克隆法分別克隆得到兩個SBP基因的cDNA的全長序列,因其與蘋果數(shù)據(jù)庫中序列一致,故命名為MdSBP4和MdSBP20;利
2、用生物信息學(xué)軟件對已獲得的兩個基因進行基本的生物信息學(xué)分析;應(yīng)用實時熒光定量 PCR技術(shù)分析MdSBP4基因和MdSBP20基因在低溫、干旱、鹽堿脅迫處理(6h、12h、24h、48h、96h、120h、168h)中的表達量;構(gòu)建了過量表達載體pCAMBIA2300-MdSBP4/20和空載體pCAMBIA2300,利用花序侵染法轉(zhuǎn)化‘擬南芥’,利用PCR檢測驗證MdSBP4基因和MdSBP20基因在非生物脅迫中的功能。研究結(jié)果如下:<
3、br> 生物信息學(xué)分析表明:MdSBP4基因序列全長1473bp,包含完整開放閱讀框1473bp,編碼491個氨基酸,預(yù)測其蛋白質(zhì)分子量為53472.90Daltons,等電點為7.771。MdSBP20基因序列全長1362bp,包含完整開放閱讀框1362bp,編碼454個氨基酸,預(yù)測其蛋白質(zhì)分子量為49372.32Daltons,等電點為8.597。二者均具有明顯的SBP結(jié)構(gòu)域,包含兩個鋅指結(jié)構(gòu)Zn-1、Zn-2和雙向核定位信號區(qū)N
4、LS。
系統(tǒng)進化樹分析表明:蘋果MdSBP4與MdSBP6遺傳關(guān)系最近,蘋果MdSBP20與白梨PbSBP6遺傳關(guān)系最近。表明MdSBP4和MdSBP20是蘋果SBP家族基因中的成員,且SBP結(jié)構(gòu)域在植物進化過程中保守程度較高。
實時熒光定量PCR技術(shù)檢測表明:MdSBP4基因和MdSBP20基因均參與并調(diào)節(jié)‘青砧1號’和‘M26’的抗寒、抗旱、抗鹽堿反應(yīng);MdSBP4基因和MdSBP20基因的表達量在抗旱性強和抗鹽
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