開菲爾中菌種資源的分離培養(yǎng)與部分功能菌株研究.pdf

1、開菲爾酸奶是一種歷史悠久的發(fā)酵乳制品，由乳酸菌、醋酸菌、酵母菌等多種益生菌組成。開菲爾酸奶含有豐富的活性物質(zhì)，具有多種益生功能。乳酸菌產(chǎn)生的細菌素可以殺死食品中的腐敗微生物，它天然健康，無毒、無害，因此在對新型食品防腐劑的研發(fā)領域具有很大的潛力。除此之外有些乳酸菌菌株具有降膽固醇的功能，因此對開菲爾菌種的初步分析相當于建立了一個益生菌的資源庫，為后續(xù)益生功能的研究奠定了基礎。基于以上背景，本論文的研究內(nèi)容主要包括開菲爾菌種的篩選和鑒定，

2、開菲爾菌種宏基因組的測序分析，開菲爾中乳酸菌產(chǎn)細菌素菌株的初步篩選，開菲爾中乳酸菌降膽固醇菌株的初步篩選。（1）開菲爾菌種的篩選及細菌16SrDNA和酵母菌26SrDNA的鑒定：分別用MRS、AC、YEPD培養(yǎng)基分離，隨后采用細菌16SrDNA和酵母菌26SrDNA的PCR擴增技術，并對擴增產(chǎn)物進行序列比對。結果得到6種乳酸菌，分別是：腸膜明串球菌（Leuconostoc mesenteroides），腸膜明串球菌亞種（Leuconos

3、toc mesenteroidessubsp.mesenteroides），乳酸乳球菌（Lactococcus lactis），乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis），植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum），植物乳桿菌亞種（Lactobacillus plantarumsubsp.plantarum），共47株；3種醋酸菌，分別是東方醋酸菌（Acetobacter ori

4、entalis），沖繩醋酸菌（Acetobacter okinawensis），株醋酸菌（Acetobacter ghanensis），共19株；1種酵母菌為（Kazachstania unispora）哈薩克斯坦酵母，共7株；除此之外還有1株嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophilus）和4株糞腸球菌（Enterococcus faecalis）。
　　（2）開菲爾菌種宏基因組的測序分析：開菲爾組成復雜，乳酸

5、菌是其優(yōu)勢菌種，并且不同來源的開菲爾菌群具有高度相似性。從門水平觀察，開菲爾菌群主要由硬壁菌門和變形菌門組成，從屬的水平觀察主要由乳酸菌屬和醋酸桿菌屬組成，其次是鏈球菌屬和芽孢桿菌屬,而丙酸桿菌屬、紅螺菌科、新鞘氨醇桿菌所占比例極小。
　?。?）開菲爾中乳酸菌產(chǎn)細菌素菌株的初步篩選：實驗采用牛津杯法對從開菲爾酸奶中分離鑒定出的乳酸菌菌株進行抑菌圈實驗，篩選2次，結果表明這些乳酸菌菌株對酵母菌沒有抑菌活性，對四種細菌指示菌均有抑菌效

6、果，其中四株乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactissubsp.lactis）產(chǎn)生的抑菌圈直徑較為明顯。
　　（4）開菲爾中乳酸菌降膽固醇菌株的初步篩選：對開菲爾酸奶中分離鑒定出的乳酸菌菌株進行篩選，篩選2次，結果表明有17株菌的降膽固醇能力較好，其中一株為腸膜明串球菌亞種（Lc mesenteulides subsp. mesenteulides）；另一株為乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactissubs