24個(gè)Y-STR檢測(cè)體系的法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證及多態(tài)性調(diào)查.pdf

1、Y-STR位于Y染色體的非重組區(qū)，是Y染色體上的高多態(tài)性遺傳標(biāo)記，在有絲分裂中以單倍型的形式由父親遺傳給兒子，是父系親權(quán)鑒定和男女混合樣本檢驗(yàn)的重要遺傳標(biāo)記，也是群體遺傳學(xué)和家族譜系研究的重要工具。國(guó)內(nèi)研發(fā)的Y-STR檢測(cè)體系所包含的基因座多，在中國(guó)人群中多態(tài)性更好，但很多體系缺乏法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證和人群遺傳調(diào)查。
　　本研究按照法醫(yī)熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)體系的驗(yàn)證流程，對(duì)AGCU Y24熒光檢測(cè)體系進(jìn)行了法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)AGCU Y

2、24能檢出0.125ng男性DNA樣本的完整分型，對(duì)0.065ng的男性DNA樣本能檢出大部分等位基因;體系對(duì)PCR抑制劑的耐受性很高，能夠耐受25ng/μl的鞣酸、或50ng/μl的腐植酸、或160μmol/L血紅素;體系PCR反應(yīng)組分濃度變化的冗余度比較大，除在引物和反應(yīng)液濃度降低50％的情況下出現(xiàn)等位基因丟失外，組分變化的其它情況下均能對(duì)樣本進(jìn)行完整分型;在對(duì)0.5ng男性DNA樣本擴(kuò)增28至32個(gè)循環(huán)時(shí)，發(fā)現(xiàn)28個(gè)循環(huán)下也能獲得

3、峰較低的完整分型，循環(huán)次數(shù)的增加能明顯提高等位基因峰高，擴(kuò)增平衡性受影響不大，說(shuō)明體系能通過(guò)適當(dāng)增加PCR循環(huán)數(shù)，提高對(duì)微量檢材的檢驗(yàn)?zāi)芰ΑＴ谀心谢旌衔餃y(cè)試中，當(dāng)弱勢(shì)供體與優(yōu)勢(shì)供體的DNA量比例大于1∶4時(shí)，AGCU Y24能夠很好地將混合物中弱勢(shì)供體的基因型檢驗(yàn)出。在男女混合樣本測(cè)試中，本研究發(fā)現(xiàn)，在第一階段退火溫度為60℃的條件下，AGCU Y24體系比較容易受女性成分干擾，會(huì)產(chǎn)生固定的非特異性峰;本研究在將第一階段退火溫度優(yōu)化為6

4、3℃，發(fā)現(xiàn)AGCU Y24能對(duì)500ng女性DNA與0.5ng男性DNA的混合樣本進(jìn)行準(zhǔn)確分型，而體系靈敏度變化不大?？傊?，本文通過(guò)對(duì)AGCU Y24熒光檢測(cè)體系進(jìn)行了法醫(yī)學(xué)驗(yàn)證，認(rèn)為AGCU Y24體系能滿足法醫(yī)應(yīng)用的要求。
　　本研究應(yīng)用AGCU Y24和GFS24Y試劑盒，檢測(cè)了漢族、廣西瑤族、廣西壯族、廣西仡佬族、廣西苗族、廣西毛南族、廣西京族等7個(gè)民族群體共2019名無(wú)關(guān)男性個(gè)體的40個(gè)Y-STR，共檢測(cè)出337個(gè)等位基

5、因和三個(gè)多拷貝基因座的142個(gè)單體型，觀察到1938個(gè)特有單倍型、1863個(gè)唯一單倍型，總?cè)后w的PD值達(dá)0.9994。在總?cè)巳褐蠫D值最大的是DYS385ab，為0.9643;最小的是DYS438(0.4102)。AGCU Y24比YfilerTM體系多的6個(gè)基因座多態(tài)性高，更能滿足法醫(yī)DNA檢驗(yàn)的需求。40個(gè)Y-STR在漢族的多態(tài)性最高，而在廣西瑤族的多態(tài)性最低。本研究認(rèn)為在應(yīng)用Y-STR進(jìn)行法醫(yī)DNA鑒定時(shí)，要重視樣本所屬個(gè)體的民族