b-FGF在誘導(dǎo)上皮間質(zhì)化過程中對Notch1及Hes1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　探討Notch信號通路中相關(guān)信號分子在堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor,b-FGF）誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞A549間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的表達(dá)情況，進(jìn)一步明確b-FGF誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的分子機(jī)制，為肺纖維化治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：
　　體外常規(guī)培養(yǎng)A549細(xì)胞株，使其生長至對數(shù)期，應(yīng)用無血清培養(yǎng)基同步化培養(yǎng)12h后，分成四組：A組即空白對照組；B組即b-FGF(

2、10ng/ml)組：向細(xì)胞培養(yǎng)液中加入 b-FGF，使其終濃度為10ng/m1；C組即b-FGF+DAPT組：向細(xì)胞培養(yǎng)液中加入b-FGF，使其終濃度為10ng/m1同時加入DAPT（Notch信號通路抑制劑）使其終濃度為100nmol/m1；D組即DAPT組：正常培養(yǎng)的A549加入DAPT（Notch信號通路抑制劑）使其終濃度為100nmol/m1。以上各組細(xì)胞，均于48h后收集處理，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；用RT-PCR的方法

3、檢測細(xì)胞E-鈣黏蛋白、α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Notch1、Hes1 mRNA表達(dá)的水平，用Western blot的方法檢測E-鈣黏蛋白、α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化
　　正常對照組細(xì)胞 A549呈現(xiàn)鵝卵石樣緊密排列生長；經(jīng)過b-FGF處理48h后的A549細(xì)胞呈梭形、紡錘形，細(xì)胞出現(xiàn)偽足，細(xì)胞

4、排列較對照組松散，出現(xiàn)明顯形態(tài)學(xué)改變；加入Notch信號通路抑制劑DAPT組（C組及D組）的細(xì)胞形態(tài)與正常對照組比較，細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。
　　2、RT-PCR結(jié)果
　　與A組比較，B組α-SMA、Notch1、Hes1 mRNA表達(dá)增高，而E-鈣黏蛋白 mRNA表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與B組比較，C組與D組α-SMA、Notch1、Hes1 mRNA表達(dá)下降，而E-鈣黏蛋白 mRNA表達(dá)較高，差異有統(tǒng)計

5、學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3、Western blotting結(jié)果
　　與A組比較，B組α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表達(dá)較高，而E-鈣黏蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與B組比較，C組與D組α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表達(dá)下降，而E-鈣黏蛋白表達(dá)較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、b-FGF通過下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)，上調(diào)α-SMA的表達(dá)，誘導(dǎo)上皮