粒毛盤菌DP5胞外多酚發(fā)酵條件、純化及生物活性研究.pdf

1、本文對(duì)粒毛盤菌DP5產(chǎn)胞外多酚發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)多酚的合成代謝途徑、純化與活性進(jìn)行了研究。
　　通過對(duì)粒毛盤菌DP5發(fā)酵條件的優(yōu)化，提高了其胞外多酚的產(chǎn)量，得到的較優(yōu)培養(yǎng)基為:甘油20g/L，酵母粉3g/L，氯化鎂0.286g/L，自然pH;培養(yǎng)條件:裝液量100mL/250mL，培養(yǎng)溫度30℃，搖床轉(zhuǎn)速180r/min;接種方法:平板挖塊接種，接種量為1cm×1cm。在此條件下，粒毛盤菌DP5的胞外多酚產(chǎn)量可達(dá)0.84mg

2、GAE/mL。為了進(jìn)一步提高粒毛盤菌DP5胞外多酚的產(chǎn)量，對(duì)多酚的合成代謝途徑做了初步的探究。通過分別添加聚酮途徑、莽草酸途徑和甲羥戊酸途徑的抑制劑，初步確認(rèn)粒毛盤菌DP5胞外多酚的合成途徑為莽草酸途徑和聚酮途徑，進(jìn)一步添加這兩個(gè)途徑的前體物質(zhì)來提高粒毛盤菌DP5胞外多酚的產(chǎn)量，其添加量為丙二酸12mmol/L，水楊酸12mmol/L。
　　利用有機(jī)溶劑萃取法和水解法對(duì)粒毛盤菌DP5胞外多酚進(jìn)行初步純化。萃取法中通過有機(jī)溶劑萃取實(shí)

3、驗(yàn)得出正丁醇的萃取效果最佳，對(duì)正丁醇萃取條件進(jìn)行優(yōu)化，得出最優(yōu)條件為:多酚粗提液與正丁醇的料液比為1∶2，提取1次，萃取pH為2，不添加鹽類物質(zhì)，在此條件下粒毛盤菌DP5胞外多酚的含量可以達(dá)到432.7mgGAE/g。另外，在水解試驗(yàn)中，得到粒毛盤菌DP5胞外多酚的最佳水解條件為:水解溫度為80℃，水解時(shí)間為3h，鹽酸的濃度為1mol/L，多酚的含量提高到372.5mgGAE/g。
　　利用大孔樹脂吸附法對(duì)粒毛盤菌DP5胞外多酚正

4、丁醇相進(jìn)行進(jìn)一步純化。采用靜態(tài)實(shí)驗(yàn)，從D1300、D101、X-5、AB-8、D201、D70和硅膠7種填充料中選擇出效果較好的大孔樹脂X-5，并對(duì)其進(jìn)行動(dòng)態(tài)解析和吸附實(shí)驗(yàn)，得出最佳條件為:進(jìn)樣濃度為0.64mg/mL，進(jìn)樣流速為1mL/min，洗脫溶劑為80％的乙醇，洗脫流速為1mL/min，得到的粒毛盤菌DP5胞外多酚的含量為815.7mgGAE/g。
　　對(duì)粒毛盤菌DP5胞外多酚各提取相進(jìn)行活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)粒毛盤菌DP5胞外多