米曲霉產(chǎn)中性蛋白酶高產(chǎn)菌株的選育及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、中性蛋白酶是一類最適作用pH為6.5~7.5的蛋白酶,它能將大分子蛋白質(zhì)水解為肽類和游離氨基酸,被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和皮革等行業(yè)。
　　本論文以米曲霉H0作為出發(fā)菌株,經(jīng)紫外線、DES復(fù)合誘變,通過干酪素培養(yǎng)基篩選,得到一株中性蛋白酶高產(chǎn)菌株H2-5,其酶活力達(dá)到2158 U/g,傳代培養(yǎng)10代,菌株遺產(chǎn)穩(wěn)定性能良好。
　　確定了該菌株復(fù)合誘變的條件為:15 W紫外燈照射,距離為25 cm,照射時間為120 s;DES誘變

2、濃度為2％,誘變時間15 min。通過復(fù)合誘變,篩選出一株產(chǎn)中性蛋白酶酶活力較高的菌株H2-5,其酶活較出發(fā)菌株提高了108.5%。
　　研究了發(fā)酵培養(yǎng)條件對菌株的產(chǎn)酶影響:其中碳氮源、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、料水比及培養(yǎng)基初始pH值等對酶活影響較大;活性劑、無機(jī)鹽對酶活也有影響。通過單因素實(shí)驗(yàn)確定了培養(yǎng)基組成為:碳源為麥麩、氮源為豆粕、碳氮比為4:1、料水比為5:4,確定了培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)時間為84 h、初始培養(yǎng)基pH值為7.5、活

3、性劑為吐溫-80、無機(jī)鹽為KH2PO4和Na2HPO4、培養(yǎng)溫度為30~32℃(前36 h為32℃,后期溫度為30℃),還確定了Ca2+對酶活的抑制作用。
　　研究了以單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為參照,利用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)來確定多因素對米曲霉產(chǎn)中性蛋白酶的影響。通過響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,發(fā)酵培養(yǎng)基的最適配方為:麥麩13.42 g,豆粕3.45 g,料水比1.29,中性蛋白酶產(chǎn)量為5561.76 U/g,經(jīng)過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測酶活力為5604 U/g,發(fā)現(xiàn)模